 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 4/1 | 返回列表 |
| 查看: 5524 | 回復(fù): 39 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
畢赤酵母高拷貝篩選 已有2人參與
|
|||
|
如題，本人新手，做蛋白分子改造的，之前將目的基因構(gòu)建在pPICZaA和pGAPZaA上并利用博萊霉素篩選高拷貝，濃度達到1ug/ml，菌落PCR后挑取陽性菌落搖瓶表達，結(jié)果表達量極低�，F(xiàn)在改變策略構(gòu)建到pPIC9K上用G418篩選高拷貝，想問問各位達人G418能不能和氨芐同時使用，因為之前做的時候涂布His+轉(zhuǎn)化子的G418平板老是不長酵母而長雜菌。另外還想問問是不是帶有his tag的蛋白酵母的表達量會降低？因為我想要拿比較高表達量的菌株對該蛋白進行表征。有文獻建議His+轉(zhuǎn)化子不經(jīng)過G418篩選高拷貝而直接以深孔板培養(yǎng)篩選高表達量菌株，各位覺得哪種方法更靠譜呢？在同一個梯度的平板上，各菌株的表達量差異會否很大？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有255人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
|
根據(jù)方法做了一下，很是奇怪，所有的G418 YPD平板在培養(yǎng)三天后依然沒有酵母生長，奇怪的是有雜菌生長，而且所有的物品均已按規(guī)則滅菌或過濾，能否直接從his原始板上挑來表達？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
32樓2015-10-09 09:34:39
★
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2015-10-07 22:53:11
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2015-10-07 22:53:11
|
梯度加壓，增加zeocin濃度，篩選到2000的濃度，調(diào)取克隆進行表達小試進一步篩選。根據(jù)經(jīng)驗，高濃度板子上長出來的克隆表達量不見得高，曾有過不表達的情況。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2015-10-05 00:11:58
3樓2015-10-05 00:25:14
3976084924樓2015-10-05 12:29:11
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +8 | z1z2z3879 2026-03-18 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 336求調(diào)劑 +4 | 收到VS 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 336化工調(diào)劑 +4 | 王大坦1 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +6 | 87639 2026-03-21 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專業(yè) 282分求調(diào)劑 +11 | 楓橋ZL 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 冬十三 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工306 +4 | z1z2z3879 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +3 | 北道巷 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求 B區(qū) 調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22 350 本科985求調(diào)劑，求老登收留 +3 | 李軼男003 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 二本跨考鄭大材料306英一數(shù)二 +3 | z1z2z3879 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +3 | 晨昏線與星海 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料工程專碩330分求調(diào)劑 +8 | 小材化本科 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料求調(diào)劑，總分315（英一） +5 | sbdksD 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +9 | 想上學(xué)吖吖 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +5 | pupcoco 2026-03-17 | 8/400 |
|