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923158905銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
二相代謝孵育體系溶液配制 已有1人參與
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想請教些問題,我做的是葡萄糖醛酸化反應(yīng),關(guān)于孵育體系的配制,我需要配制四種溶液A(UDPGA);B(D-葡萄糖二酸1,4-內(nèi)酯,丙甲菌素,MgCl2);C(樣品溶液);D(UGT酶溶液),然后將溶液冷凍分裝,使用時溶解移取適量體積,使孵育體系總體積為100 uL。 (1)UDPGA不太穩(wěn)定,是不是不可以配成溶液長期冷凍保存,要現(xiàn)配現(xiàn)用?配成溶液冷凍保存有什么影響? (2)我能把B溶液和D溶液配制在一起,作為一個溶液嗎? (3)我只知道反復(fù)凍融對酶的活性有影響,所以要將酶溶液分裝成小份以減少凍融次數(shù),但其他的溶液(A,B,C)還需要分裝成小份進(jìn)行保存嗎? (4)丙甲菌素在水中的溶解性怎樣啊?可以直接用緩沖液配制嗎? 謝謝大家! |
銅蟲 (小有名氣)
銅蟲 (小有名氣)
鐵蟲 (初入文壇)
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(1)UDPGA要現(xiàn)配現(xiàn)用。如果你真的要配成溶液冷凍,建議挑幾個對照化合物,做一下驗證實驗,看看冷凍后是否有影響。 2)不建議配在一起 3)最好都配成小份,凍存。 (4)丙甲菌素在書中溶解性一般。建議配在DMSO等有機(jī)相,配成高濃度,實驗時取少量加到反應(yīng)體系。 PS.做科研,最好每一步都嚴(yán)格按要求來,否則一旦有問題,很難分析原因。如果想節(jié)省步奏,改變條件,一定要先做驗證實驗。 還有個問題,如果你用的是基因工程技術(shù)生成的UGT酶,應(yīng)該就不需要丙甲菌素了吧。我們用microsomes做實驗,才加丙甲菌素,目的是穿孔,讓UGT釋放出來。 |

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