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Deng_Cheng鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá) 已有3人參與
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1. 當(dāng)OD=0.6左右時(shí),加入IPTG誘導(dǎo)目的基因的表達(dá),如果設(shè)置對照為不加入IPTG,則對照組經(jīng)過相同的誘導(dǎo)條件后,菌液發(fā)生了什么變化,是一直在繁殖嗎? 2. 原核表達(dá)時(shí),IPTG誘導(dǎo)時(shí),如何設(shè)置對照? |
新蟲 (初入文壇)
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我認(rèn)為,對照應(yīng)為空載質(zhì)粒,而不是不加IPTG,原因如下: 1.IPTG會抑制細(xì)胞生長,以不加IPTG為對照,那么對照組和實(shí)驗(yàn)組的菌體生長不同步,在以后全細(xì)胞蛋白分析中,大腸桿菌自身的蛋白會有較大差異,影響判斷。 2.培養(yǎng)基中成分復(fù)雜,比如LB培養(yǎng)基中的酵母抽提物含有少量乳糖,就算不加IPTG,蛋白也會被乳糖誘導(dǎo),導(dǎo)致蛋白分析時(shí)背景表達(dá)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 3.以空載載體做空白,對照和實(shí)驗(yàn)組都加IPTG,那么實(shí)驗(yàn)中的變量就是有無目的基因的表達(dá)。這樣就不存在蛋白的背景表達(dá),之后的蛋白分析就十分方便且清晰,并且可以評估外源蛋白表達(dá)對菌體生長的影響。 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
鐵蟲 (小有名氣)
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