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關(guān)于SDS-PAGE電泳問(wèn)題 已有2人參與
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| SDS-PAGE中為什么分離膠可以分離不同分子量大小的蛋白亞基而濃縮膠只能將蛋白質(zhì)壓成一條窄帶 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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宇文詩(shī)暢: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 解釋的很詳細(xì) 2015-10-19 14:00:56
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宇文詩(shī)暢: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 解釋的很詳細(xì) 2015-10-19 14:00:56
| 濃縮膠和分離膠的PH值不同，前者主要表現(xiàn)為濃縮效用，后者表現(xiàn)為電荷效用和分子篩效用。濃縮效應(yīng)主要在濃縮膠中完成，濃縮膠的pH6.8，在這個(gè)pH條件下，緩沖液中的HCl的Cl離子幾乎全部解離，Gly的等電點(diǎn)為6.0，僅少數(shù)解離為負(fù)離子，在電場(chǎng)中移動(dòng)速度很慢。酸性蛋白質(zhì)在此pH下解離為負(fù)離子，三類離子的遷移速率為Cl>一般蛋白質(zhì)>Gly，電泳開(kāi)始后，Cl離子泳動(dòng)快，在其后留下一個(gè)低離子濃度區(qū)。Gly在電場(chǎng)中移動(dòng)很慢，造成移動(dòng)離子的缺乏，于是快慢離子間就形成了一個(gè)缺少離子的高壓區(qū)，在高壓區(qū)內(nèi)所有的負(fù)離子都會(huì)加速移動(dòng)，當(dāng)移到Cl離子區(qū)域時(shí)，高電壓消失，蛋白質(zhì)的移動(dòng)速度慢下來(lái)，當(dāng)以上穩(wěn)定狀態(tài)建立后，蛋白質(zhì)樣品在快慢離子間被濃縮形成一個(gè)狹小的之間層，并按蛋白質(zhì)所帶負(fù)電荷量的多少依次排列成帶，濃縮樣品，從濃縮膠進(jìn)入分離膠后，膠的pH升高，Gly的離解度增大，泳動(dòng)率上升，又因?yàn)樗肿有�，故超過(guò)所有的蛋白質(zhì)分子，緊跟在Cl離子后，Cl離子遷移后，低離子濃度不再存在，形成了恒定的電場(chǎng)強(qiáng)度，因此，蛋白質(zhì)樣品在分離膠中的分離主要取決于它的電荷性質(zhì)，分子大小和形狀，分離膠的孔徑有一定大小，對(duì)不同相對(duì)質(zhì)量的蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)，通過(guò)時(shí)收到的滯阻作用不同，即使靜電荷相等的顆粒，也會(huì)由于這種分子篩的效應(yīng)，把不同大小的蛋白質(zhì)相互分開(kāi)。 |
3樓2015-10-19 13:50:04
2樓2015-10-19 13:47:08
4樓2015-10-19 14:01:58
5樓2015-10-19 14:03:50
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