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[求助]
關于SDS-PAGE電泳問題 已有2人參與
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| SDS-PAGE中為什么分離膠可以分離不同分子量大小的蛋白亞基而濃縮膠只能將蛋白質(zhì)壓成一條窄帶 |
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4樓2015-10-19 14:01:58
2樓2015-10-19 13:47:08
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
宇文詩暢: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 解釋的很詳細 2015-10-19 14:00:56
感謝參與，應助指數(shù) +1
宇文詩暢: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 解釋的很詳細 2015-10-19 14:00:56
| 濃縮膠和分離膠的PH值不同，前者主要表現(xiàn)為濃縮效用，后者表現(xiàn)為電荷效用和分子篩效用。濃縮效應主要在濃縮膠中完成，濃縮膠的pH6.8，在這個pH條件下，緩沖液中的HCl的Cl離子幾乎全部解離，Gly的等電點為6.0，僅少數(shù)解離為負離子，在電場中移動速度很慢。酸性蛋白質(zhì)在此pH下解離為負離子，三類離子的遷移速率為Cl>一般蛋白質(zhì)>Gly，電泳開始后，Cl離子泳動快，在其后留下一個低離子濃度區(qū)。Gly在電場中移動很慢，造成移動離子的缺乏，于是快慢離子間就形成了一個缺少離子的高壓區(qū)，在高壓區(qū)內(nèi)所有的負離子都會加速移動，當移到Cl離子區(qū)域時，高電壓消失，蛋白質(zhì)的移動速度慢下來，當以上穩(wěn)定狀態(tài)建立后，蛋白質(zhì)樣品在快慢離子間被濃縮形成一個狹小的之間層，并按蛋白質(zhì)所帶負電荷量的多少依次排列成帶，濃縮樣品，從濃縮膠進入分離膠后，膠的pH升高，Gly的離解度增大，泳動率上升，又因為它分子小，故超過所有的蛋白質(zhì)分子，緊跟在Cl離子后，Cl離子遷移后，低離子濃度不再存在，形成了恒定的電場強度，因此，蛋白質(zhì)樣品在分離膠中的分離主要取決于它的電荷性質(zhì)，分子大小和形狀，分離膠的孔徑有一定大小，對不同相對質(zhì)量的蛋白質(zhì)來說，通過時收到的滯阻作用不同，即使靜電荷相等的顆粒，也會由于這種分子篩的效應，把不同大小的蛋白質(zhì)相互分開。 |
3樓2015-10-19 13:50:04
5樓2015-10-19 14:03:50
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