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向日21新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
要表達(dá)蛋白，構(gòu)建重組質(zhì)粒，好幾次不成功 已有7人參與
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要表達(dá)蛋白，構(gòu)建重組質(zhì)粒，我設(shè)計(jì)的酶切引物上只有酶切位點(diǎn)6個(gè)堿基，無(wú)論如何都連不上，是因?yàn)榕c質(zhì)粒的同源壁太短么？我的片段長(zhǎng)兩千五百bp。我該怎么設(shè)計(jì)引物，同源壁要多長(zhǎng)？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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xl0071334
至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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向日21(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-01-05 19:25:30
向日21(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-01-05 19:25:30
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樓主的引物沒(méi)有保護(hù)堿基，所以PCR產(chǎn)物沒(méi)有切開(kāi)，如果不換引物的話，建議先連T載體 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2016-01-05 07:09:49
曼陀羅的祈禱
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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8樓2016-01-05 09:31:06
qinqqjiajia
新蟲(chóng) (初入文壇)
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9樓2016-01-05 10:46:18
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
向日21(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-01-05 19:25:04
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
向日21(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-01-05 19:25:04
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你的片段不長(zhǎng)，應(yīng)該問(wèn)題不大，可能原因有幾個(gè)：第一，酶切位點(diǎn)前一般需要設(shè)置保護(hù)堿基，第二，你做酶切反應(yīng)時(shí)，沒(méi)有切開(kāi)，第三，連接效率不高，第四，你的切好的載體有問(wèn)題，第五，酶切時(shí)時(shí)間太長(zhǎng)，片段切碎了。供參考 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
2樓2015-12-06 10:22:19
向日21
新蟲(chóng) (小有名氣)
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我還想再問(wèn)一下，質(zhì)粒的濃度要達(dá)到多少連接效率會(huì)好一點(diǎn)，我之前做的只有10ng/ul 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
3樓2015-12-06 10:39:46
曼陀羅的祈禱
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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4樓2016-01-04 22:41:51
chun.shui
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6樓2016-01-05 07:10:19
7樓2016-01-05 09:00:52
10樓2016-01-05 16:52:00
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