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向日21新蟲 (小有名氣)
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[求助]
要表達蛋白，構(gòu)建重組質(zhì)粒，好幾次不成功 已有7人參與
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要表達蛋白，構(gòu)建重組質(zhì)粒，我設(shè)計的酶切引物上只有酶切位點6個堿基，無論如何都連不上，是因為與質(zhì)粒的同源壁太短么？我的片段長兩千五百bp。我該怎么設(shè)計引物，同源壁要多長？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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xl0071334
至尊木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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向日21(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-01-05 19:25:30
向日21(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-01-05 19:25:30
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樓主的引物沒有保護堿基，所以PCR產(chǎn)物沒有切開，如果不換引物的話，建議先連T載體 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-01-05 07:09:49
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
向日21(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2016-01-05 19:25:04
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
向日21(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2016-01-05 19:25:04
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你的片段不長，應(yīng)該問題不大，可能原因有幾個：第一，酶切位點前一般需要設(shè)置保護堿基，第二，你做酶切反應(yīng)時，沒有切開，第三，連接效率不高，第四，你的切好的載體有問題，第五，酶切時時間太長，片段切碎了。供參考 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2015-12-06 10:22:19
向日21
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3樓2015-12-06 10:39:46
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4樓2016-01-04 22:41:51
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