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MR_zang新蟲 (初入文壇)
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[求助]
葡聚糖凝膠純化蛋白 已有1人參與
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| 本人用的G-75的凝膠過蛋白，蛋白我用水重懸的，然后冷離心，過濾膜，但是蛋白還是沒有洗脫出來，我又重復(fù)了一次。然后我用0.1mol NaOH清洗，有蛋白被洗脫出來，就懷疑蛋白沉淀了易或是柱子堵住了，然后就重新裝柱，再進(jìn)樣品，結(jié)果還是沒有洗脫出來。然后發(fā)現(xiàn)4°剩余的蛋白已經(jīng)有部分沉淀了，就懷疑蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性比較差，希望各位高人給點(diǎn)建議對(duì)于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性有增加？或者是我上述有什么不對(duì)的地方才導(dǎo)致的這種結(jié)果？ |
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hc-material
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MR_zang(99503102代發(fā)): 金幣+2, 謝謝應(yīng)助，請(qǐng)繼續(xù)為其他蟲友解答噢！ 2015-12-21 09:33:24
MR_zang: 金幣+3 2015-12-21 14:14:42
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MR_zang: 金幣+3 2015-12-21 14:14:42
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問題描述的不是很清楚。蛋白什么來源？用水重懸的是什么蛋白，純度多少，雜質(zhì)大概都有啥？沒洗出來你是如何判斷的?4°剩余的用水重懸的蛋白有部分沉淀，是溫度降低溶解度降低么，還是蛋白變性了？ 建議，蛋白在純水中的穩(wěn)定性很差，建議重懸時(shí)使用一定濃度的緩沖液，比如50mM 的PBS。等。另外過凝膠過濾柱子，你的沒洗出來是否是體積沒洗夠，祝順利。 |
2樓2015-12-21 09:16:34
MR_zang
新蟲 (初入文壇)
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3樓2015-12-21 14:14:38
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4樓2015-12-21 14:17:58
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