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i760912798木蟲 (正式寫手)
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[求助]
PCR退火溫度設(shè)定多少合適 已有11人參與
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| 我剛到拿到合成的引物，引物合成單上的一條引物的Tm值為54℃，一條引物Tm值為50℃，pcr退火溫度設(shè)定多少合適？我想設(shè)定退火溫度為53℃，不知道是否合適？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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你這引物怎么設(shè)計(jì)的��？才50°的退火溫度。你引物不會(huì)低于16nt吧？一般在60左右比較好。你這種情況個(gè)人覺得用50度試試，如果不行，設(shè)置一個(gè)梯度實(shí)驗(yàn)，45~55之間吧！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2015-12-20 00:13:17
取個(gè)什么名啊
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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這個(gè)你做一個(gè)梯度pcr，摸一下退火溫度，跑個(gè)膠看一下就行了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2015-12-19 19:08:17
科學(xué)小覃
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3樓2015-12-19 20:39:50
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4樓2015-12-19 23:18:42
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一般50到55最好，如果這個(gè)區(qū)間不能擴(kuò)增出來，其他的也夠嗆了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2015-12-20 00:36:45
glove94
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可以的話，摸梯度的時(shí)候溫度跨度可以大一點(diǎn)，47～57度試試，不過最有可能的Tm可能就是在50～54之間 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2015-12-20 00:51:13
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合成單上的只是參考，不同方法計(jì)算出來的TM值都不一樣，我之前在不同的公司合成的同一引物，給的TM值都不一樣。還是建議你自己做個(gè)梯度吧 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2015-12-20 09:20:59
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