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1002432022金蟲 (小有名氣)
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[求助]
請教一個酵母單雜交的問題 已有2人參與
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最近做單雜實驗發(fā)現(xiàn)一個怪問題,我做點對點的。我把要驗證的轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建到pGADT7-rec2載體上,與pHis2的空載共同轉(zhuǎn)化Y187,本來要拿這個做陰性對照的,可是在三缺板子上長得很歡樂呀,加了3AT,并且已經(jīng)加的濃度很高了,還是生長!但是我的實驗組,就是轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建到pGADT7-rec2載體上,目標(biāo)啟動子構(gòu)建到pHis2載體上共同轉(zhuǎn)化Y187,在三缺板上長,加了3AT之后反倒不長了!有沒有大神遇到過類似問題,或者幫忙解釋一下? 還有一點,我看了pHIS2的序列,在HIS3前面,Pmin區(qū)域里也有我的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點,會不會是我的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到那里去了?不知道有沒有這個可能性?這個minimum promoter是不是只有GAL4AD才能結(jié)合呢?如果非要做,這段區(qū)域能不能改造呢?求指點啊~ 還有,我也試過了pAbAi系統(tǒng)的,一樣的問題,只轉(zhuǎn)了空載pAbAi,然后再把我的轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建在pGADT7上,轉(zhuǎn)化,AbA已經(jīng)加到3ug/ml了,還是生長!求指點這種激活空載的問題怎么解決啊~~~ |
生物科學(xué)系列 |
金蟲 (小有名氣)
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