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1002432022金蟲 (小有名氣)
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[求助]
請教一個酵母單雜交的問題 已有2人參與
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最近做單雜實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)一個怪問題，我做點(diǎn)對點(diǎn)的。我把要驗(yàn)證的轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建到pGADT7-rec2載體上，與pHis2的空載共同轉(zhuǎn)化Y187，本來要拿這個做陰性對照的，可是在三缺板子上長得很歡樂呀，加了3AT，并且已經(jīng)加的濃度很高了，還是生長！但是我的實(shí)驗(yàn)組，就是轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建到pGADT7-rec2載體上，目標(biāo)啟動子構(gòu)建到pHis2載體上共同轉(zhuǎn)化Y187，在三缺板上長，加了3AT之后反倒不長了！有沒有大神遇到過類似問題，或者幫忙解釋一下？ 還有一點(diǎn)，我看了pHIS2的序列，在HIS3前面，Pmin區(qū)域里也有我的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，會不會是我的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到那里去了？不知道有沒有這個可能性��？這個minimum promoter是不是只有GAL4AD才能結(jié)合呢？如果非要做，這段區(qū)域能不能改造呢？求指點(diǎn)啊~ 還有，我也試過了pAbAi系統(tǒng)的，一樣的問題，只轉(zhuǎn)了空載pAbAi，然后再把我的轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建在pGADT7上，轉(zhuǎn)化，AbA已經(jīng)加到3ug/ml了，還是生長！求指點(diǎn)這種激活空載的問題怎么解決啊~~~ |
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6樓2016-03-03 23:54:37
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我們用的醋酸鋰，30度放在培養(yǎng)箱就好了，反正酵母要30度培養(yǎng)嘛！另外，我們實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在水浴的操作基本都改成恒溫金屬浴了，調(diào)節(jié)溫度很快，就不需要搞兩個水浴鍋什么的了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-03-03 23:59:09
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你好，我最近也在做酵母單雜交，用的是y187，之前實(shí)驗(yàn)室可能把酵母菌污染了，之后劃線，酵母菌落長得很快，菌落形態(tài)不太一樣，因此，想問問酵母單雜可不可以用AH109，質(zhì)粒用的是PGADT 7和phis 2載體。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2016-11-26 11:03:42
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