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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 生物化學 » 請教一個酵母單雜交的問題
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1002432022金蟲 (小有名氣)
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[求助]
請教一個酵母單雜交的問題 已有2人參與
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最近做單雜實驗發(fā)現(xiàn)一個怪問題，我做點對點的。我把要驗證的轉錄因子構建到pGADT7-rec2載體上，與pHis2的空載共同轉化Y187，本來要拿這個做陰性對照的，可是在三缺板子上長得很歡樂呀，加了3AT，并且已經加的濃度很高了，還是生長！但是我的實驗組，就是轉錄因子構建到pGADT7-rec2載體上，目標啟動子構建到pHis2載體上共同轉化Y187，在三缺板上長，加了3AT之后反倒不長了！有沒有大神遇到過類似問題，或者幫忙解釋一下？ 還有一點，我看了pHIS2的序列，在HIS3前面，Pmin區(qū)域里也有我的轉錄因子結合位點，會不會是我的轉錄因子結合到那里去了？不知道有沒有這個可能性��？這個minimum promoter是不是只有GAL4AD才能結合呢？如果非要做，這段區(qū)域能不能改造呢？求指點啊~ 還有，我也試過了pAbAi系統(tǒng)的，一樣的問題，只轉了空載pAbAi，然后再把我的轉錄因子構建在pGADT7上，轉化，AbA已經加到3ug/ml了，還是生長！求指點這種激活空載的問題怎么解決啊~~~ |
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1002432022
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我們用的醋酸鋰，30度放在培養(yǎng)箱就好了，反正酵母要30度培養(yǎng)嘛！另外，我們實驗室現(xiàn)在水浴的操作基本都改成恒溫金屬浴了，調節(jié)溫度很快，就不需要搞兩個水浴鍋什么的了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-03-03 23:59:09
2樓2016-01-14 15:29:38
1002432022
金蟲 (小有名氣)
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3樓2016-02-04 19:53:25
張凡云
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4樓2016-02-05 08:42:12
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