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1002432022金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
請(qǐng)教一個(gè)酵母單雜交的問(wèn)題 已有2人參與
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最近做單雜實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)一個(gè)怪問(wèn)題，我做點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的。我把要驗(yàn)證的轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建到pGADT7-rec2載體上，與pHis2的空載共同轉(zhuǎn)化Y187，本來(lái)要拿這個(gè)做陰性對(duì)照的，可是在三缺板子上長(zhǎng)得很歡樂(lè)呀，加了3AT，并且已經(jīng)加的濃度很高了，還是生長(zhǎng)！但是我的實(shí)驗(yàn)組，就是轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建到pGADT7-rec2載體上，目標(biāo)啟動(dòng)子構(gòu)建到pHis2載體上共同轉(zhuǎn)化Y187，在三缺板上長(zhǎng)，加了3AT之后反倒不長(zhǎng)了！有沒(méi)有大神遇到過(guò)類似問(wèn)題，或者幫忙解釋一下？ 還有一點(diǎn)，我看了pHIS2的序列，在HIS3前面，Pmin區(qū)域里也有我的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，會(huì)不會(huì)是我的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到那里去了？不知道有沒(méi)有這個(gè)可能性��？這個(gè)minimum promoter是不是只有GAL4AD才能結(jié)合呢？如果非要做，這段區(qū)域能不能改造呢？求指點(diǎn)啊~ 還有，我也試過(guò)了pAbAi系統(tǒng)的，一樣的問(wèn)題，只轉(zhuǎn)了空載pAbAi，然后再把我的轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建在pGADT7上，轉(zhuǎn)化，AbA已經(jīng)加到3ug/ml了，還是生長(zhǎng)！求指點(diǎn)這種激活空載的問(wèn)題怎么解決啊~~~ |
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酵母不用抗生素，所以操作要十分小心，因?yàn)楹苋菀孜廴�。離心只要蓋好離心管蓋子拿出來(lái)離心就好了，水浴一樣的。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
6樓2016-03-03 23:54:37
qingxiong
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2樓2016-01-14 15:29:38
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3樓2016-02-04 19:53:25
張凡云
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4樓2016-02-05 08:42:12
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5樓2016-03-03 20:06:26
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我們用的醋酸鋰，30度放在培養(yǎng)箱就好了，反正酵母要30度培養(yǎng)嘛！另外，我們實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在水浴的操作基本都改成恒溫金屬浴了，調(diào)節(jié)溫度很快，就不需要搞兩個(gè)水浴鍋什么的了。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
7樓2016-03-03 23:59:09
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8樓2016-03-04 11:18:33
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9樓2016-03-05 12:12:12
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你好，我最近也在做酵母單雜交，用的是y187，之前實(shí)驗(yàn)室可能把酵母菌污染了，之后劃線，酵母菌落長(zhǎng)得很快，菌落形態(tài)不太一樣，因此，想問(wèn)問(wèn)酵母單雜可不可以用AH109，質(zhì)粒用的是PGADT 7和phis 2載體。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
10樓2016-11-26 11:03:42
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