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1002432022金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
請(qǐng)教一個(gè)酵母單雜交的問(wèn)題 已有2人參與
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最近做單雜實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)一個(gè)怪問(wèn)題,我做點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的。我把要驗(yàn)證的轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建到pGADT7-rec2載體上,與pHis2的空載共同轉(zhuǎn)化Y187,本來(lái)要拿這個(gè)做陰性對(duì)照的,可是在三缺板子上長(zhǎng)得很歡樂(lè)呀,加了3AT,并且已經(jīng)加的濃度很高了,還是生長(zhǎng)!但是我的實(shí)驗(yàn)組,就是轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建到pGADT7-rec2載體上,目標(biāo)啟動(dòng)子構(gòu)建到pHis2載體上共同轉(zhuǎn)化Y187,在三缺板上長(zhǎng),加了3AT之后反倒不長(zhǎng)了!有沒(méi)有大神遇到過(guò)類(lèi)似問(wèn)題,或者幫忙解釋一下? 還有一點(diǎn),我看了pHIS2的序列,在HIS3前面,Pmin區(qū)域里也有我的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),會(huì)不會(huì)是我的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到那里去了?不知道有沒(méi)有這個(gè)可能性。窟@個(gè)minimum promoter是不是只有GAL4AD才能結(jié)合呢?如果非要做,這段區(qū)域能不能改造呢?求指點(diǎn)啊~ 還有,我也試過(guò)了pAbAi系統(tǒng)的,一樣的問(wèn)題,只轉(zhuǎn)了空載pAbAi,然后再把我的轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建在pGADT7上,轉(zhuǎn)化,AbA已經(jīng)加到3ug/ml了,還是生長(zhǎng)!求指點(diǎn)這種激活空載的問(wèn)題怎么解決啊~~~ |
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