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[求助]
關(guān)于red重組的問題 已有1人參與
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各位蟲友大家好，最近在做red重組敲除沙門氏菌的兩個基因，其中有一個已經(jīng)做成功，另外一個在轉(zhuǎn)入同源壁片段之后，在抗性板子上長出了幾個斑，挑斑用抗性LB搖菌。在要敲除的基因兩側(cè)和內(nèi)部分別設(shè)計(jì)兩對引物進(jìn)行pcr鑒定，這時(shí)奇怪的事發(fā)生了，在基因兩側(cè)設(shè)計(jì)的引物擴(kuò)增出來兩條帶，一大一小，測序后大的一條為該目的基因序列，小的一條為抗性基因序列，為什么會發(fā)生這種事，抗性片段應(yīng)該是交換上去了，不然在抗性板子上不會長，應(yīng)該沒有污染，每次都做了陰性對照，沒有條帶，而且后來用菌液劃了兩次抗性板子挑單菌落 純化，但是還是擴(kuò)展出來兩條帶，基本可以排除污染的可能。后來我在genebank上找了一下標(biāo)準(zhǔn)沙門的序列，沒有多拷貝，到底是怎么回事？？？求高手指導(dǎo)。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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poiu250
新蟲 (初入文壇)
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3樓2016-10-22 13:24:31
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xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-10-26 08:39:56
xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-10-26 08:39:56
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提取敲除了基因的小鼠基因組，在你敲除的基因兩側(cè)設(shè)計(jì)引物，pcr擴(kuò)增然后測序比對就知道了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2016-10-26 08:02:59
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