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cyl-1銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于red重組的問(wèn)題 已有1人參與
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各位蟲(chóng)友大家好，最近在做red重組敲除沙門(mén)氏菌的兩個(gè)基因，其中有一個(gè)已經(jīng)做成功，另外一個(gè)在轉(zhuǎn)入同源壁片段之后，在抗性板子上長(zhǎng)出了幾個(gè)斑，挑斑用抗性LB搖菌。在要敲除的基因兩側(cè)和內(nèi)部分別設(shè)計(jì)兩對(duì)引物進(jìn)行pcr鑒定，這時(shí)奇怪的事發(fā)生了，在基因兩側(cè)設(shè)計(jì)的引物擴(kuò)增出來(lái)兩條帶，一大一小，測(cè)序后大的一條為該目的基因序列，小的一條為抗性基因序列，為什么會(huì)發(fā)生這種事，抗性片段應(yīng)該是交換上去了，不然在抗性板子上不會(huì)長(zhǎng)，應(yīng)該沒(méi)有污染，每次都做了陰性對(duì)照，沒(méi)有條帶，而且后來(lái)用菌液劃了兩次抗性板子挑單菌落 純化，但是還是擴(kuò)展出來(lái)兩條帶，基本可以排除污染的可能。后來(lái)我在genebank上找了一下標(biāo)準(zhǔn)沙門(mén)的序列，沒(méi)有多拷貝，到底是怎么回事？？？求高手指導(dǎo)。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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cyl-1
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xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-10-26 08:39:56
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提取敲除了基因的小鼠基因組，在你敲除的基因兩側(cè)設(shè)計(jì)引物，pcr擴(kuò)增然后測(cè)序比對(duì)就知道了 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
4樓2016-10-26 08:02:59
cyl-1
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3樓2016-10-22 13:24:31
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