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[求助]
關(guān)于大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá) 已有2人參與
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用的是pet29b，我的蛋白37度3h誘導(dǎo)后全部是包涵體，很明顯，上清基本無。然后22度誘導(dǎo)11h后沉淀中沒有目的蛋白，上清中少，但比之前要多。這是不是說明，我應(yīng)該在37度和22度之間摸條件呢？還有我聽說低iptg有助于降低包涵體，但是為何我覺得1mM的好像比0.1mM和0.02mM的好像上清中要多一點呢 還有就是，如果大體積誘導(dǎo)，多少升細(xì)菌液合適呢？ 問題比較多，謝謝各位啦  |
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結(jié)果出來了，我給自己回個貼吧，試了26度和30度誘導(dǎo)，也沒有包含體了，對比后發(fā)現(xiàn)還是22度低溫誘導(dǎo)上清中比較多，于是大體積誘導(dǎo)時做了20度0.5mM誘導(dǎo)了16h，雖然不多，但結(jié)果還算滿意，這樣終于可以回家好好過年嘍～～感謝大家了，以及努力了那么久的自己 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
10樓2016-01-25 15:24:22
4樓2016-01-20 09:50:43
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5樓2016-01-20 16:43:53
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8樓2016-01-22 12:04:15
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9樓2016-01-22 12:05:35
2樓2016-01-19 17:59:06
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3樓2016-01-20 08:41:54
送紅花一朵 |
我又做了26度30度過夜的，比較看，覺得22度0.5mM好像多一點，我打算用20度大體積誘導(dǎo)純化，做完就可以回家啦，所以這一次挺重要的，你說的過夜是多少小時呢？如果我20度誘導(dǎo)的話，你覺得誘導(dǎo)劑濃度0.5合適不？時間14—16h？多謝啦 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
6樓2016-01-21 14:28:22
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哦哦，剛注意你說的時間。再請問一下，his標(biāo)簽的，過柱的話，像我這種上清中蛋白少的，洗脫液15ml會不會出來的蛋白濃度就小，需要減少洗脫液的量嗎 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2016-01-21 14:35:38
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