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[交流]
In-fusion 克隆，做了很久沒有出結果，求助 已有10人參與
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最近一直在做in-fusion 克隆連接，片段插入載體（14300bp），目的片段1023bp。 買的In-Fusion Cloning Kit貨號是639649，只包含一支50個反應的5×premix，一支pUC19線性化載體和一個2kb的片段。我按照說明書的方法配好反應混合液之后（載體150-200ng，目的片段80ng，載體和目的片段各1 uL,5×premix 1uL,總體系51uL），50℃反應15min，然后轉化DH5α感受態(tài)細胞。轉化至感受態(tài)細胞的的反應液的量2uL、3uL、5uL均用過。但是第二天發(fā)現(xiàn)只有陽性的pUC19正常長起了陽性單菌落，我的克隆樣品一個菌都不長。引物同源序列片段檢查了很多次，沒有問題。載體和目的片段都是凝膠回收的純化的。現(xiàn)在不知道問題出在哪里了，請有經(jīng)驗的蟲友們出出招，多謝了！ |
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9樓2016-02-21 14:09:49
phyter
鐵桿木蟲 (小有名氣)
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可以試試摩爾比1:3 overlap 20bp 載體150ng ok 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-02-21 09:17:32
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2樓2016-02-19 13:53:02
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