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fMssop新蟲 (初入文壇)
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[求助]
In-fusion 連接 已有1人參與
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實(shí)驗(yàn)室采用In-fusion 連接的方法，連接質(zhì)粒與目的片段。 將質(zhì)粒用相應(yīng)酶切之后，用In-fusion酶連接，之后轉(zhuǎn)化。發(fā)現(xiàn)連接效率特別低，生長周期很長，甚至出現(xiàn)過連接不上的情況，請(qǐng)問有什么解決方法。體系如下 IN-fusion 酶 1微升 載體 2微升 目的片段 2微升 |
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2樓2015-10-20 22:54:38
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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說一下我的個(gè)人做法， 1.質(zhì)粒載體，雙酶切后再回收總感覺濃度不夠，索性20u酶切體系中加入1ug質(zhì)粒酶切（限制酶說明是1-1.5ug），然后按infusion說明書上說的，酶切后65°c（大概是這個(gè)）保溫幾分鐘使限制酶失活，每次做的時(shí)候取3ul左右（放了半個(gè)月左右，又拿出來用了一次還是沒問題）。 2.pcr產(chǎn)物試劑盒純化后測(cè)下濃度，適當(dāng)稀釋后使用 lz配方寫的太簡略了，沒說什么牌子什么產(chǎn)品，并且沒有說明質(zhì)粒和片段濃度，還有，lz你是不是沒加緩沖液 |
3樓2015-10-20 23:39:41
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nono2009: 金幣-20, 屏蔽內(nèi)容, 違規(guī)存檔, 禁止回帖廣告 2015-10-25 10:08:49
nono2009: 金幣-20, 屏蔽內(nèi)容, 違規(guī)存檔, 禁止回帖廣告 2015-10-25 10:08:49
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4樓2015-10-21 08:16:13
fMssop
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 76.5
- 帖子: 41
- 在線: 12.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 3130454
- 注冊(cè): 2014-04-12
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學(xué)
5樓2015-10-22 18:09:27
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