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薇筱123新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助�。�！雙酶切連接不上這是為什么 已有7人參與
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| 實(shí)驗(yàn)想要讓一個(gè)7000左右bp的質(zhì)粒載體變小一點(diǎn)，所以用Kpn1和Not1雙酶切，切下一個(gè)400bp左右的片段，跑膠，但是看不到400bp的條帶，然后In-fusion連上一個(gè)20bp左右的片段，然后轉(zhuǎn)化，涂板子，都不長(zhǎng)菌，這是說(shuō)明我的雙酶切沒(méi)成功還是沒(méi)有連上那個(gè)20bp的片段，我要怎樣改進(jìn)實(shí)驗(yàn)?zāi)�？求指�?dǎo)！都重復(fù)實(shí)驗(yàn)好幾次了，都成功不了�。� |
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kangaroo0513
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2樓2015-10-15 01:31:57
【答案】應(yīng)助回帖
商家已經(jīng)主動(dòng)聲明此回帖可能含有宣傳內(nèi)容
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建議送到公司做，速度快，質(zhì)量有保障，價(jià)格還不貴：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=110 僅供參考！ |
9樓2015-10-15 12:29:11
thetc
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查一下你那2個(gè)酶的最適條件，把你實(shí)驗(yàn)的條件調(diào)整調(diào)整把。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
3樓2015-10-15 07:35:22
厚德求是
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轉(zhuǎn)化不成功的原因可能有非常多，連接酶的效率，反應(yīng)的條件，感受態(tài)的效率，抗性的選擇。建議設(shè)立對(duì)照組，逐一排查上述問(wèn)題。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
4樓2015-10-15 07:42:19
ocean_of_yu
木蟲(chóng) (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感覺(jué)你的酶切就有問(wèn)題，優(yōu)化酶切體系和條件，確認(rèn)一下是不是質(zhì)粒和目的基因上都有相同的酶切位點(diǎn)～ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2015-10-15 07:53:41
jianguochen
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6樓2015-10-15 09:16:43
liping121200
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首先，你雙酶切跑電泳沒(méi)有400bp條帶，基本是證明你酶切不成功，就更不要提后面的連接了，你把你的酶切條件展示出來(lái)給大伙看看，讓大家給你分析分析，利于你一步一步把問(wèn)題解決了。 再者，你的目的片段只有20bp，片段酶切位點(diǎn)都加上了嗎 哪怕是連接不成功，空載體轉(zhuǎn)入到感受態(tài)細(xì)胞，也能長(zhǎng)出菌的吧，估計(jì)你的感受態(tài)也可能有問(wèn)題。 |
7樓2015-10-15 09:43:56
15853830932
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我也做infusion，不知道你的marker跑的亮不亮。亮度要看核酸大小，400bp太小了，不一定能看出來(lái)。你酶切完后可以直接化轉(zhuǎn)，看看效率如何。證明酶切是否成功。然后再做infusion。你用的哪家公司的？酶切完回收了嗎？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
8樓2015-10-15 09:46:51
薇筱123
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10樓2015-10-15 13:59:06
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