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薇筱123新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助！��！雙酶切連接不上這是為什么 已有7人參與
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| 實(shí)驗(yàn)想要讓一個(gè)7000左右bp的質(zhì)粒載體變小一點(diǎn)，所以用Kpn1和Not1雙酶切，切下一個(gè)400bp左右的片段，跑膠，但是看不到400bp的條帶，然后In-fusion連上一個(gè)20bp左右的片段，然后轉(zhuǎn)化，涂板子，都不長菌，這是說明我的雙酶切沒成功還是沒有連上那個(gè)20bp的片段，我要怎樣改進(jìn)實(shí)驗(yàn)?zāi)�？求指�?dǎo)！都重復(fù)實(shí)驗(yàn)好幾次了，都成功不了�。� |
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15853830932
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我也做infusion，不知道你的marker跑的亮不亮。亮度要看核酸大小，400bp太小了，不一定能看出來。你酶切完后可以直接化轉(zhuǎn)，看看效率如何。證明酶切是否成功。然后再做infusion。你用的哪家公司的？酶切完回收了嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2015-10-15 09:46:51
kangaroo0513
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2樓2015-10-15 01:31:57
thetc
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查一下你那2個(gè)酶的最適條件，把你實(shí)驗(yàn)的條件調(diào)整調(diào)整把。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2015-10-15 07:35:22
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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轉(zhuǎn)化不成功的原因可能有非常多，連接酶的效率，反應(yīng)的條件，感受態(tài)的效率，抗性的選擇。建議設(shè)立對照組，逐一排查上述問題。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2015-10-15 07:42:19
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