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[求助]
求助�。。‰p酶切連接不上這是為什么 已有7人參與
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| 實驗想要讓一個7000左右bp的質粒載體變小一點，所以用Kpn1和Not1雙酶切，切下一個400bp左右的片段，跑膠，但是看不到400bp的條帶，然后In-fusion連上一個20bp左右的片段，然后轉化，涂板子，都不長菌，這是說明我的雙酶切沒成功還是沒有連上那個20bp的片段，我要怎樣改進實驗呢？求指導！都重復實驗好幾次了，都成功不了��！ |
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kangaroo0513
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2樓2015-10-15 01:31:57
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9樓2015-10-15 12:29:11
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3樓2015-10-15 07:35:22
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【答案】應助回帖
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轉化不成功的原因可能有非常多，連接酶的效率，反應的條件，感受態(tài)的效率，抗性的選擇。建議設立對照組，逐一排查上述問題。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2015-10-15 07:42:19
ocean_of_yu
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7樓2015-10-15 09:43:56
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myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:13:03
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我也做infusion，不知道你的marker跑的亮不亮。亮度要看核酸大小，400bp太小了，不一定能看出來。你酶切完后可以直接化轉，看看效率如何。證明酶切是否成功。然后再做infusion。你用的哪家公司的？酶切完回收了嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2015-10-15 09:46:51
10樓2015-10-15 13:59:06
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