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薇筱123新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助�。。‰p酶切連接不上這是為什么 已有7人參與
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| 實驗想要讓一個7000左右bp的質(zhì)粒載體變小一點，所以用Kpn1和Not1雙酶切，切下一個400bp左右的片段，跑膠，但是看不到400bp的條帶，然后In-fusion連上一個20bp左右的片段，然后轉(zhuǎn)化，涂板子，都不長菌，這是說明我的雙酶切沒成功還是沒有連上那個20bp的片段，我要怎樣改進(jìn)實驗?zāi)兀壳笾笇?dǎo)！都重復(fù)實驗好幾次了，都成功不了�。� |
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厚德求是
木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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轉(zhuǎn)化不成功的原因可能有非常多，連接酶的效率，反應(yīng)的條件，感受態(tài)的效率，抗性的選擇。建議設(shè)立對照組，逐一排查上述問題。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2015-10-15 07:42:19
kangaroo0513
新蟲 (正式寫手)
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2樓2015-10-15 01:31:57
thetc
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myprayer: 金幣+1, 鼓勵發(fā)帖積極交流。 2015-10-15 18:11:39
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查一下你那2個酶的最適條件，把你實驗的條件調(diào)整調(diào)整把。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2015-10-15 07:35:22
ocean_of_yu
木蟲 (正式寫手)
Cool
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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感覺你的酶切就有問題，優(yōu)化酶切體系和條件，確認(rèn)一下是不是質(zhì)粒和目的基因上都有相同的酶切位點～ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2015-10-15 07:53:41
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