 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1069 | 回復(fù): 6 | |||
[求助]
目的基因連接載體 已有1人參與
|
|
各位大神看看我這個目的基因和載體連接上了沒有啊 么么么噠 （瓊脂糖凝膠電泳） 目的基因 759bp 載體 4000bp marker200-4500 圖從左往右依次是 marker 目的基因 載體 重組的質(zhì)粒 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有257人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 目的基因與載體連接后菌液PCR檢測引物用什么
已經(jīng)有0人回復(fù)
- 求助百度文庫“第六章I 目的基因與載體的連接”
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 目的基因與載體雙酶切后過夜連接，轉(zhuǎn)化子在試管培養(yǎng)基中卻長不出來？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 目的基因和表達(dá)載體連接不上，求指導(dǎo)�。�！
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 關(guān)于目的基因與載體連接后轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞提取質(zhì)粒的問題。
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 載體與目的基因連接
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 目的基因與T載體連接后的保存問題
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 目的基因與載體連接問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 目的基因連接表達(dá)載體的質(zhì)粒PCR驗證，結(jié)果出現(xiàn)2條帶
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 如何將保存在克隆載體上的目的基因連接到表達(dá)載體上
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 目的基因構(gòu)建載體方向問題概念有點不清楚，請教各位大俠
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 目的基因連接到克隆載體后提取質(zhì)粒測序，序列有問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 外源基因連接載體
已經(jīng)有17人回復(fù)
- pMD18-T載體與目的基因連接后構(gòu)建的質(zhì)粒能通過接合轉(zhuǎn)移到一些難以轉(zhuǎn)化的細(xì)菌中嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 構(gòu)建pBI121表達(dá)載體，目的基因與載體連接不上
已經(jīng)有54人回復(fù)
- 關(guān)于目的基因與載體結(jié)合的問題，目的基因與載體結(jié)合有方向性嗎？
已經(jīng)有0人回復(fù)
- 【求助/交流】目的基因連接表達(dá)載體后涂板不長菌
已經(jīng)有11人回復(fù)
2樓2017-08-10 14:35:00
llsskk112233
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 558.8
- 散金: 470
- 紅花: 4
- 帖子: 329
- 在線: 264.4小時
- 蟲號: 3938037
- 注冊: 2015-06-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物藥物
3樓2017-08-10 14:51:39
4樓2017-08-10 15:38:57
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
1、酶有沒有壞 內(nèi)切酶可以找載體分別做單酶切后電泳驗證 連接酶可以用單酶切的載體，割膠純化后，讓其自連。注意要作一個不加連接酶的對照。 連接酶的buffer要小心，它比較容易壞，建議買來后先10－20ul分裝，用一次取一管，多余的部分都扔了，不要反復(fù)凍融。 2、感受態(tài)細(xì)胞 用已知濃度的質(zhì)粒，稀釋后，做轉(zhuǎn)化，涂板，看菌落數(shù)來判斷感受態(tài)的效率。這一步，同時把平板的問題也解決了。 3、連接比例 多做幾個比例嘗試，記住一點，不要怕載體不夠，載體過多會嚴(yán)重影響連接效率的。我的經(jīng)驗是，取5ug載體，雙酶切后，割膠純化，溶于100ul水中，再稀釋5－10倍后，取1ul用于10－20ul的連接體系。至于插入片段，根據(jù)電泳結(jié)果，如果比較濃的，就加1ul，很淡的話就加7ul，這個影響不是很大的。 4、酶切位點的問題 這個問題比較少見，主要出現(xiàn)在載體上的兩個酶切位點是連在一起的時候，可能出現(xiàn)一個位點切開后，導(dǎo)致另一個位點的保護堿基不足而無法切開，這樣的話，你要考慮不要兩個酶分開切，先切難切的，再切容易切的。 在選擇雙酶切載體的時候，盡量選擇帶插入片段的質(zhì)粒，這樣載體的雙酶切是否成功比較明確。 |
5樓2017-08-10 16:39:47
第二泳道應(yīng)該是載體單酶切電泳圖，一般驗證目的片段和載體是否連接上的方法：單酶切和載體單酶切跑膠比對，連接產(chǎn)物4759bp，載體4kb，酶切驗證無誤，還需要送到公司測序，測序結(jié)果還需要進行NCBI-blast序列比對，直到100%了，才算鏈接成功。還望對你有幫助 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
6樓2017-08-11 16:50:35
7樓2017-08-11 16:51:51
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 美美肉 的主題更新
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0856材料與化工調(diào)劑，339 +6 | 10213207 2026-03-31 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求調(diào)劑 +10 | 李李不服輸 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑推薦 +6 | 清酒714 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿北林食品與營養(yǎng)095500，301分，已過六級，有科研經(jīng)歷 +3 | 快樂儲蓄罐 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[論文投稿]
chinese chemical letters英文版投稿求助
 130+4
|
Yishengeryi 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)求調(diào)劑 +12 | 小黃鴨寶 2026-03-30 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 086000調(diào)劑 +5 | 7901117076 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 生醫(yī)工0831調(diào)劑求推薦 +4 | 小熊睿睿_s 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 學(xué)碩274求調(diào)劑 +17 | Li李魚 2026-03-26 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 一志愿085600中科院寧波所276分求調(diào)劑 +12 | 材料學(xué)257求調(diào)劑 2026-03-28 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大材料工程290求調(diào)劑 +12 | Youth_ 2026-03-30 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +8 | 十閑wx 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085600 286分 材料求調(diào)劑 +11 | 麻辣魷魚 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程找調(diào)劑 +17 | oatmealR 2026-03-29 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +10 | 張zz111 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +10 | 鈕恩雪 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分調(diào)劑 +4 | 大饞小子 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 中國科學(xué)院深圳先進技術(shù)研究院-光纖傳感課題組招生-中國科學(xué)院大學(xué)、深圳理工大學(xué)聯(lián)培 +5 | YangTyu1 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 07化學(xué)303求調(diào)劑 +5 | 睿08 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調(diào)劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|