版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門版塊排行榜

返回列表

急躁的小脾氣

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 55.3
帖子: 27
在線: 9.2小時(shí)
蟲號(hào): 3386648
注冊(cè): 2014-08-28
性別: MM
專業(yè): 食品加工技術(shù)

[求助] QPCR溶解曲線問題

求助大神。。。
開始我用普通PCR跑了這對(duì)引物，也跑了膠，結(jié)果還蠻好的，沒有引物二聚體和非特異性，產(chǎn)物長度也是對(duì)的，283bp。
但是用QPCR做了之后，大多數(shù)溶解曲線出現(xiàn)雙峰，還有的峰的位置都變了。
求大神賜教，我這種情況是樣本被污染了嗎？

AC07F37566F8953944E91A807B6F2A8D.jpg@biostar2009

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有231人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

關(guān)于溶解曲線-RT-qPCR熔解曲線標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒和樣品的峰值Tm值不同已經(jīng)有18人回復(fù)
熒光定量qPCR內(nèi)參基因的CT問題及熔解曲線已經(jīng)有1人回復(fù)
qPCR溶解曲線Tm問題已經(jīng)有4人回復(fù)
急急急！求助關(guān)于QPCR的溶解曲線問題，大神看下我的結(jié)果能不能用啊已經(jīng)有10人回復(fù)
關(guān)于qPCR的溶解曲線問題已經(jīng)有3人回復(fù)
qpcr溶解曲線問題已經(jīng)有1人回復(fù)
打算做qpcr 遇到一些問題希望大家看一看已經(jīng)有15人回復(fù)
qPCR引物設(shè)計(jì)問題已經(jīng)有0人回復(fù)
請(qǐng)問一下羅氏480做qPCR怎樣看溶解曲線��？已經(jīng)有0人回復(fù)
QPCR溶解曲線問題已經(jīng)有5人回復(fù)
求助qPCR相關(guān)問題！新手，真的好糾結(jié)啊已經(jīng)有10人回復(fù)
SYBR Green I染料法real time qPCR熔解曲線的問題已經(jīng)有4人回復(fù)
RT-qPCR 已經(jīng)有13人回復(fù)
QPCR產(chǎn)物跑膠問題已經(jīng)有10人回復(fù)
QPCR之擴(kuò)增效率已經(jīng)有8人回復(fù)
還是QPCR 已經(jīng)有11人回復(fù)
QPCR 溶解曲線已經(jīng)有9人回復(fù)
求高人指點(diǎn)qpcr問題，擴(kuò)增效率太高！已經(jīng)有14人回復(fù)
QPCR空白對(duì)照問題已經(jīng)有4人回復(fù)
qpcr 溶解曲線成了這個(gè)鬼樣子請(qǐng)問各位專家問題可能出在哪了已經(jīng)有9人回復(fù)
關(guān)于qPCR的幾個(gè)問題，求解答已經(jīng)有3人回復(fù)
IQ5 RT-QPCR問題求助已經(jīng)有8人回復(fù)
一個(gè)關(guān)于qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題。謝謝！已經(jīng)有12人回復(fù)
幫我看看這個(gè)溶解qPCR曲線已經(jīng)有6人回復(fù)

1樓 2017-04-10 15:29:23

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

回帖支持 ( 顯示支持度最高的前 50 名 )

idealgas

新蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 628.8
紅花: 2
帖子: 95
在線: 9.7小時(shí)
蟲號(hào): 2134057
注冊(cè): 2012-11-18
性別: GG
專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)與生殖生物學(xué)

★
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-04-12 22:13:11

確切說qPCR條件跟普通pcr條件不一樣，檢測(cè)精度也不一樣，經(jīng)驗(yàn)告訴我用普通pcr檢測(cè)q的不能說明什么問題。另外電泳的檢測(cè)靈敏度也可能看不到非特異性擴(kuò)增產(chǎn)生的條帶，而

發(fā)自小木蟲Android客戶端

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

2樓2017-04-10 16:46:38

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

深�？葱�

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 178
帖子: 21
在線: 36.8小時(shí)
蟲號(hào): 4457481
注冊(cè): 2016-03-02
專業(yè): 果樹學(xué)

有的時(shí)候普通p跑出來的qpcr也不一定能跑出來。普通p只是大概看下引物特異性。

發(fā)自小木蟲IOS客戶端

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

3樓2017-04-10 16:53:36

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

idealgas

新蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 628.8
紅花: 2
帖子: 95
在線: 9.7小時(shí)
蟲號(hào): 2134057
注冊(cè): 2012-11-18
性別: GG
專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)與生殖生物學(xué)

引用回帖:

4樓: Originally posted by 急躁的小脾氣 at 2017-04-10 21:51:40
那我的結(jié)果里有些溶解曲線是可取的，這幾條能用嗎？
...

溶解曲線單一峰就可用。如果你不考慮擴(kuò)增效率的話。

發(fā)自小木蟲Android客戶端

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

5樓2017-04-10 22:21:59

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

niil

金蟲 (正式寫手)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 35 (小學(xué)生)
金幣: 6673.5
紅花: 3
帖子: 835
在線: 233.2小時(shí)
蟲號(hào): 876426
注冊(cè): 2009-10-18
性別: GG
專業(yè): 生物信息學(xué)

你這個(gè)雜峰的位置可能是引物二聚體，你的實(shí)時(shí)定量pcr程序如何？你用的引物的退火溫度是多少？

發(fā)自小木蟲Android客戶端

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

Stop fighting,let it flow.

6樓2017-04-11 06:41:09

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

急躁的小脾氣

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 55.3
帖子: 27
在線: 9.2小時(shí)
蟲號(hào): 3386648
注冊(cè): 2014-08-28
性別: MM
專業(yè): 食品加工技術(shù)

引用回帖:

3樓: Originally posted by 深�？葱� at 2017-04-10 16:53:36
有的時(shí)候普通p跑出來的qpcr也不一定能跑出來。普通p只是大概看下引物特異性。

嗯的確是這樣但是我這個(gè)情況貌似和樣本也有關(guān)系，畢竟有些樣本的溶解曲線是正常的，但大部分樣本p出來的出現(xiàn)的可能是引物二聚體。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

9樓2017-04-11 08:47:11

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

普通回帖

急躁的小脾氣

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 55.3
帖子: 27
在線: 9.2小時(shí)
蟲號(hào): 3386648
注冊(cè): 2014-08-28
性別: MM
專業(yè): 食品加工技術(shù)

引用回帖:

2樓: Originally posted by idealgas at 2017-04-10 16:46:38
確切說qPCR條件跟普通pcr條件不一樣，檢測(cè)精度也不一樣，經(jīng)驗(yàn)告訴我用普通pcr檢測(cè)q的不能說明什么問題。另外電泳的檢測(cè)靈敏度也可能看不到非特異性擴(kuò)增產(chǎn)生的條帶，而
...

那我的結(jié)果里有些溶解曲線是可取的，這幾條能用嗎？

發(fā)自小木蟲IOS客戶端

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2017-04-10 21:51:40

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

急躁的小脾氣

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 55.3
帖子: 27
在線: 9.2小時(shí)
蟲號(hào): 3386648
注冊(cè): 2014-08-28
性別: MM
專業(yè): 食品加工技術(shù)

哦好的謝謝

回復(fù)此樓

7樓2017-04-11 08:39:18

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

急躁的小脾氣

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 55.3
帖子: 27
在線: 9.2小時(shí)
蟲號(hào): 3386648
注冊(cè): 2014-08-28
性別: MM
專業(yè): 食品加工技術(shù)

引用回帖:

6樓: Originally posted by niil at 2017-04-11 06:41:09
你這個(gè)雜峰的位置可能是引物二聚體，你的實(shí)時(shí)定量pcr程序如何？你用的引物的退火溫度是多少？

退火溫度是54℃，程序是：95℃預(yù)變性3min，變性10s，54度10s，72℃15s，40個(gè)循環(huán)，65℃（0:05），升溫到95℃
樣本不同，產(chǎn)生引物二聚體的情況不同，總共有24個(gè)樣本，只有幾條是沒有出現(xiàn)引物二聚體的。

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2017-04-11 08:45:06

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fengzi3321

銀蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 230.4
帖子: 35
在線: 53.4小時(shí)
蟲號(hào): 3310294
注冊(cè): 2014-07-06
性別: GG
專業(yè): 植物生理與生化

換引物吧

發(fā)自小木蟲Android客戶端

回復(fù)此樓

10樓2017-04-12 22:09:29

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn) 我要訂閱樓主急躁的小脾氣的主題更新

返回列表

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 【考研調(diào)劑】化學(xué)專業(yè) 281分，一志愿四川大學(xué)，誠心求調(diào)劑 +12	吃吃吃才有意義 2026-03-19	13/650	2026-03-24 10:06 by NCUT_Yu
[考研] 環(huán)境學(xué)碩288求調(diào)劑 +8	皮皮皮123456 2026-03-22	8/400	2026-03-23 23:47 by 熱情沙漠
[考研] 材料專碩找調(diào)劑 +3	哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23	3/150	2026-03-23 23:13 by peike
[考研] 384求調(diào)劑 +3	子系博 2026-03-22	6/300	2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 一志愿陜師大生物學(xué)071000，298分，求調(diào)劑 +3	SYA！ 2026-03-23	3/150	2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 336求調(diào)劑 +4	收到VS 2026-03-20	4/200	2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +8	困于星晨 2026-03-17	10/500	2026-03-23 13:05 by 醉在風(fēng)里
[考研] 311求調(diào)劑 +6	冬十三 2026-03-18	6/300	2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 313求調(diào)劑 +4	肆叁貳壹22 2026-03-19	4/200	2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 求調(diào)劑 +3	.m.. 2026-03-21	4/200	2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 268求調(diào)劑 +9	簡單點(diǎn)0 2026-03-17	9/450	2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 求調(diào)劑 +6	Mqqqqqq 2026-03-19	6/300	2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 材料 336 求調(diào)劑 +3	An@. 2026-03-18	4/200	2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 304求調(diào)劑 +6	曼殊2266 2026-03-18	6/300	2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 330求調(diào)劑 +4	小材化本科 2026-03-18	4/200	2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 考研調(diào)劑求學(xué)校推薦 +3	伯樂29 2026-03-18	5/250	2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5	February_Feb 2026-03-19	5/250	2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4	18889395102 2026-03-18	4/200	2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +5	pupcoco 2026-03-17	8/400	2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3	1喜春8 2026-03-17	5/250	2026-03-17 17:18 by ber川cool子