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GracePoppy新蟲 (初入文壇)
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[求助]
Bradford法定量蛋白質(zhì) 已有2人參與
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| 請問大家，誰經(jīng)常用Bradford法定量蛋白呀，我定了幾次蛋白，標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2老是達(dá)不到三個(gè)9，每次只能達(dá)到1個(gè)9，請各位給我提供下用此方法定量的詳細(xì)步驟吧，越詳細(xì)越好，如從試劑配制開始。要是有完整的protocal的話，就更好了。還有決定實(shí)驗(yàn)成敗的注意事項(xiàng)有哪些呢，謝謝。 |
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fuyuandj86
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流！ 2014-01-04 00:28:40
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盡量按照說明書在規(guī)定的線性范圍內(nèi)做標(biāo)準(zhǔn)曲線, 和Bradford的染料反應(yīng)后要統(tǒng)一等5分鐘,等顏色穩(wěn)定下來再測,但是不要等的時(shí)間太長 不過話又說回來, 標(biāo)準(zhǔn)曲線R2達(dá)不到3個(gè)9又不礙事,我Bradford標(biāo)準(zhǔn)曲線從來都到不了那么好的線性 這個(gè)Bradford定量濃度本來就有誤差, 他的顯色機(jī)制和你氨基酸的組成有關(guān),如果你的蛋白里Arg,Trp,Phe,Pro比較多,那他顏色就會(huì)顯得更深. 結(jié)果就是你用不同的蛋白做標(biāo)準(zhǔn)曲線都會(huì)有差別, 標(biāo)準(zhǔn)曲線搞那么精細(xì)完全沒必要,湊合能用就行了 |
2樓2014-01-03 23:17:31
GracePoppy
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3樓2014-01-05 23:29:26
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【答案】應(yīng)助回帖
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大神，請問考馬斯亮藍(lán)G250能測尿液里的總蛋白嗎？想用考馬斯亮藍(lán)G250測尿液里的蛋白濃度，然后乘以尿量，得出尿液里一共多少蛋白。這個(gè)辦法可行嗎？請大神指點(diǎn)謝謝大神 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2017-04-24 11:17:51
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