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[求助]
iptg誘導(dǎo)大腸桿菌表達(dá) 已有2人參與
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我做了重組質(zhì)粒，一個(gè)蛋白和熒光蛋白的結(jié)合，然后轉(zhuǎn)導(dǎo)到大腸桿菌中。 用iptg誘導(dǎo)載體質(zhì)粒表達(dá)，蛋白和熒光蛋白結(jié)合的產(chǎn)物。 但現(xiàn)在出現(xiàn)了大腸桿菌不游動(dòng)的情況。 經(jīng)過(guò)一些實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)加入iptg的時(shí)候，od的值對(duì)結(jié)果有一定影響。 但是還是沒(méi)有達(dá)到想要的結(jié)果，游動(dòng)雖然有，但還是不正常。 想問(wèn)iptg誘導(dǎo)，誘導(dǎo)的時(shí)間點(diǎn)和溫度對(duì)細(xì)菌表達(dá)可溶性蛋白的產(chǎn)物有多大影響？ 求各位大神解答～ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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11樓2016-03-19 11:37:41
2樓2016-03-17 13:43:14
3樓2016-03-17 16:59:00
nyjznj2010
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- 專(zhuān)業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 一般不都是在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期開(kāi)始誘導(dǎo)的嘛！你可以試試確定一下你這個(gè)菌種的生長(zhǎng)曲線，一般重組大腸都可以用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)的，37℃搖床培養(yǎng)的話，每一個(gè)小時(shí)取一下樣，測(cè)個(gè)OD值，直到OD不再變化，這個(gè)時(shí)間點(diǎn)前后就可以加入IPTG誘導(dǎo)了。還有就是每次的接種量不同的話，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期的時(shí)間也不一樣咧！如果是37攝氏度發(fā)酵罐培養(yǎng)的，經(jīng)驗(yàn)上一般接種后4個(gè)小時(shí)左右就可以誘導(dǎo)了。看你的培養(yǎng)條件了。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
4樓2016-03-17 17:11:20
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