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iptg誘導大腸桿菌表達 已有2人參與
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我做了重組質(zhì)粒，一個蛋白和熒光蛋白的結(jié)合，然后轉(zhuǎn)導到大腸桿菌中。 用iptg誘導載體質(zhì)粒表達，蛋白和熒光蛋白結(jié)合的產(chǎn)物。 但現(xiàn)在出現(xiàn)了大腸桿菌不游動的情況。 經(jīng)過一些實驗驗證，發(fā)現(xiàn)加入iptg的時候，od的值對結(jié)果有一定影響。 但是還是沒有達到想要的結(jié)果，游動雖然有，但還是不正常。 想問iptg誘導，誘導的時間點和溫度對細菌表達可溶性蛋白的產(chǎn)物有多大影響？ 求各位大神解答～ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2016-03-17 13:43:14
3樓2016-03-17 16:59:00
nyjznj2010
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
| 一般不都是在對數(shù)生長后期開始誘導的嘛！你可以試試確定一下你這個菌種的生長曲線，一般重組大腸都可以用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)的，37℃搖床培養(yǎng)的話，每一個小時取一下樣，測個OD值，直到OD不再變化，這個時間點前后就可以加入IPTG誘導了。還有就是每次的接種量不同的話，達到對數(shù)生長后期的時間也不一樣咧！如果是37攝氏度發(fā)酵罐培養(yǎng)的，經(jīng)驗上一般接種后4個小時左右就可以誘導了�？茨愕呐囵B(yǎng)條件了。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
4樓2016-03-17 17:11:20
送紅花一朵 |
我的目的并不是提取蛋白質(zhì)，大腸桿菌是我的研究對象，我是要融合蛋白在大腸桿菌中表達并且不會影響大腸桿菌的基本性質(zhì)。 現(xiàn)在的情況是，我觀察到了大腸桿菌不游，確認如果在od較大時，加入iptg，大腸桿菌不游的情況會改善。 我可以試著測測生長曲線，在對數(shù)期加入。 謝謝~ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2016-03-17 17:55:12
6樓2016-03-17 17:56:53
nyjznj2010
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7樓2016-03-18 10:56:10
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8樓2016-03-18 10:57:24
送紅花一朵 |
在od較大時，積累了大量菌體，所以此時加iptg，蛋白表達量較高。 是指每個菌體表達蛋白量不變，而由于菌體數(shù)目增多，導致整體蛋白表達量較高，還是每個菌體在接受iptg不同誘導時間，自身所產(chǎn)生的蛋白量也會發(fā)生變化？~ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
9樓2016-03-18 11:07:47
10樓2016-03-19 10:20:09
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