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[求助]
iptg誘導(dǎo)大腸桿菌表達(dá) 已有2人參與
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我做了重組質(zhì)粒,一個蛋白和熒光蛋白的結(jié)合,然后轉(zhuǎn)導(dǎo)到大腸桿菌中。 用iptg誘導(dǎo)載體質(zhì)粒表達(dá),蛋白和熒光蛋白結(jié)合的產(chǎn)物。 但現(xiàn)在出現(xiàn)了大腸桿菌不游動的情況。 經(jīng)過一些實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)加入iptg的時候,od的值對結(jié)果有一定影響。 但是還是沒有達(dá)到想要的結(jié)果,游動雖然有,但還是不正常。 想問iptg誘導(dǎo),誘導(dǎo)的時間點(diǎn)和溫度對細(xì)菌表達(dá)可溶性蛋白的產(chǎn)物有多大影響? 求各位大神解答~ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
| 一般不都是在對數(shù)生長后期開始誘導(dǎo)的嘛!你可以試試確定一下你這個菌種的生長曲線,一般重組大腸都可以用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)的,37℃搖床培養(yǎng)的話,每一個小時取一下樣,測個OD值,直到OD不再變化,這個時間點(diǎn)前后就可以加入IPTG誘導(dǎo)了。還有就是每次的接種量不同的話,達(dá)到對數(shù)生長后期的時間也不一樣咧!如果是37攝氏度發(fā)酵罐培養(yǎng)的,經(jīng)驗(yàn)上一般接種后4個小時左右就可以誘導(dǎo)了?茨愕呐囵B(yǎng)條件了。 |
送紅花一朵 |
我的目的并不是提取蛋白質(zhì),大腸桿菌是我的研究對象,我是要融合蛋白在大腸桿菌中表達(dá)并且不會影響大腸桿菌的基本性質(zhì)。 現(xiàn)在的情況是,我觀察到了大腸桿菌不游,確認(rèn)如果在od較大時,加入iptg,大腸桿菌不游的情況會改善。 我可以試著測測生長曲線,在對數(shù)期加入。 謝謝~ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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