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[求助]
iptg誘導(dǎo)大腸桿菌表達(dá) 已有2人參與
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我做了重組質(zhì)粒，一個蛋白和熒光蛋白的結(jié)合，然后轉(zhuǎn)導(dǎo)到大腸桿菌中。 用iptg誘導(dǎo)載體質(zhì)粒表達(dá)，蛋白和熒光蛋白結(jié)合的產(chǎn)物。 但現(xiàn)在出現(xiàn)了大腸桿菌不游動的情況。 經(jīng)過一些實驗驗證，發(fā)現(xiàn)加入iptg的時候，od的值對結(jié)果有一定影響。 但是還是沒有達(dá)到想要的結(jié)果，游動雖然有，但還是不正常。 想問iptg誘導(dǎo)，誘導(dǎo)的時間點和溫度對細(xì)菌表達(dá)可溶性蛋白的產(chǎn)物有多大影響？ 求各位大神解答～ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2016-03-17 13:43:14
3樓2016-03-17 16:59:00
nyjznj2010
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 一般不都是在對數(shù)生長后期開始誘導(dǎo)的嘛！你可以試試確定一下你這個菌種的生長曲線，一般重組大腸都可以用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)的，37℃搖床培養(yǎng)的話，每一個小時取一下樣，測個OD值，直到OD不再變化，這個時間點前后就可以加入IPTG誘導(dǎo)了。還有就是每次的接種量不同的話，達(dá)到對數(shù)生長后期的時間也不一樣咧！如果是37攝氏度發(fā)酵罐培養(yǎng)的，經(jīng)驗上一般接種后4個小時左右就可以誘導(dǎo)了。看你的培養(yǎng)條件了。 |
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4樓2016-03-17 17:11:20
送紅花一朵 |
我的目的并不是提取蛋白質(zhì)，大腸桿菌是我的研究對象，我是要融合蛋白在大腸桿菌中表達(dá)并且不會影響大腸桿菌的基本性質(zhì)。 現(xiàn)在的情況是，我觀察到了大腸桿菌不游，確認(rèn)如果在od較大時，加入iptg，大腸桿菌不游的情況會改善。 我可以試著測測生長曲線，在對數(shù)期加入。 謝謝~ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2016-03-17 17:55:12
6樓2016-03-17 17:56:53
nyjznj2010
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【答案】應(yīng)助回帖
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IPTG作為乳糖操縱子的誘導(dǎo)物，都是負(fù)調(diào)控機理，具體的，你可以參考下iptg的誘導(dǎo)機制。不過，我想對數(shù)期，菌體的比生長率還是很高的，要想融合蛋白表達(dá)，一般都是在對數(shù)后期開始誘導(dǎo)，這個時間點積累了大量菌體，誘導(dǎo)后，表達(dá)量也高！至于你說的你的目的不是提取蛋白，只是為了研究融合蛋白表達(dá)是否影響大腸桿菌的基本性質(zhì)，這個我倒是還沒接觸過。不過看你專業(yè)是生物化學(xué)與分子，我覺得你可以參考下IPTG的誘導(dǎo)機制，再嘗試試驗。呵呵 |
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7樓2016-03-18 10:56:10
nyjznj2010
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8樓2016-03-18 10:57:24
送紅花一朵 |
在od較大時，積累了大量菌體，所以此時加iptg，蛋白表達(dá)量較高。 是指每個菌體表達(dá)蛋白量不變，而由于菌體數(shù)目增多，導(dǎo)致整體蛋白表達(dá)量較高，還是每個菌體在接受iptg不同誘導(dǎo)時間，自身所產(chǎn)生的蛋白量也會發(fā)生變化？~ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
9樓2016-03-18 11:07:47
10樓2016-03-19 10:20:09
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