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日落沙發(fā)

新蟲 (小有名氣)

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[求助] iptg誘導(dǎo)大腸桿菌表達(dá) 已有2人參與

我做了重組質(zhì)粒，一個(gè)蛋白和熒光蛋白的結(jié)合，然后轉(zhuǎn)導(dǎo)到大腸桿菌中。
用iptg誘導(dǎo)載體質(zhì)粒表達(dá)，蛋白和熒光蛋白結(jié)合的產(chǎn)物。
但現(xiàn)在出現(xiàn)了大腸桿菌不游動(dòng)的情況。
經(jīng)過一些實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)加入iptg的時(shí)候，od的值對(duì)結(jié)果有一定影響。
但是還是沒有達(dá)到想要的結(jié)果，游動(dòng)雖然有，但還是不正常。
想問iptg誘導(dǎo)，誘導(dǎo)的時(shí)間點(diǎn)和溫度對(duì)細(xì)菌表達(dá)可溶性蛋白的產(chǎn)物有多大影響？
求各位大神解答～

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1樓 2016-03-17 13:42:39

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nyjznj2010

新蟲 (初入文壇)

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

5樓: Originally posted by 日落沙發(fā) at 2016-03-17 17:55:12
我的目的并不是提取蛋白質(zhì)，大腸桿菌是我的研究對(duì)象，我是要融合蛋白在大腸桿菌中表達(dá)并且不會(huì)影響大腸桿菌的基本性質(zhì)。
現(xiàn)在的情況是，我觀察到了大腸桿菌不游，確認(rèn)如果在od較大時(shí)，加入iptg，大腸桿菌不游的情況 ...

IPTG作為乳糖操縱子的誘導(dǎo)物，都是負(fù)調(diào)控機(jī)理，具體的，你可以參考下iptg的誘導(dǎo)機(jī)制。不過，我想對(duì)數(shù)期，菌體的比生長(zhǎng)率還是很高的，要想融合蛋白表達(dá)，一般都是在對(duì)數(shù)后期開始誘導(dǎo)，這個(gè)時(shí)間點(diǎn)積累了大量菌體，誘導(dǎo)后，表達(dá)量也高！至于你說的你的目的不是提取蛋白，只是為了研究融合蛋白表達(dá)是否影響大腸桿菌的基本性質(zhì)，這個(gè)我倒是還沒接觸過。不過看你專業(yè)是生物化學(xué)與分子，我覺得你可以參考下IPTG的誘導(dǎo)機(jī)制，再嘗試試驗(yàn)。呵呵

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