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[求助]
iptg誘導(dǎo)大腸桿菌表達 已有2人參與
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我做了重組質(zhì)粒，一個蛋白和熒光蛋白的結(jié)合，然后轉(zhuǎn)導(dǎo)到大腸桿菌中。 用iptg誘導(dǎo)載體質(zhì)粒表達，蛋白和熒光蛋白結(jié)合的產(chǎn)物。 但現(xiàn)在出現(xiàn)了大腸桿菌不游動的情況。 經(jīng)過一些實驗驗證，發(fā)現(xiàn)加入iptg的時候，od的值對結(jié)果有一定影響。 但是還是沒有達到想要的結(jié)果，游動雖然有，但還是不正常。 想問iptg誘導(dǎo)，誘導(dǎo)的時間點和溫度對細菌表達可溶性蛋白的產(chǎn)物有多大影響？ 求各位大神解答～ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2016-03-17 13:43:14
3樓2016-03-17 16:59:00
nyjznj2010
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 一般不都是在對數(shù)生長后期開始誘導(dǎo)的嘛！你可以試試確定一下你這個菌種的生長曲線，一般重組大腸都可以用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)的，37℃搖床培養(yǎng)的話，每一個小時取一下樣，測個OD值，直到OD不再變化，這個時間點前后就可以加入IPTG誘導(dǎo)了。還有就是每次的接種量不同的話，達到對數(shù)生長后期的時間也不一樣咧！如果是37攝氏度發(fā)酵罐培養(yǎng)的，經(jīng)驗上一般接種后4個小時左右就可以誘導(dǎo)了。看你的培養(yǎng)條件了。 |
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4樓2016-03-17 17:11:20
送紅花一朵 |
我的目的并不是提取蛋白質(zhì)，大腸桿菌是我的研究對象，我是要融合蛋白在大腸桿菌中表達并且不會影響大腸桿菌的基本性質(zhì)。 現(xiàn)在的情況是，我觀察到了大腸桿菌不游，確認如果在od較大時，加入iptg，大腸桿菌不游的情況會改善。 我可以試著測測生長曲線，在對數(shù)期加入。 謝謝~ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2016-03-17 17:55:12
6樓2016-03-17 17:56:53
nyjznj2010
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【答案】應(yīng)助回帖
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IPTG作為乳糖操縱子的誘導(dǎo)物，都是負調(diào)控機理，具體的，你可以參考下iptg的誘導(dǎo)機制。不過，我想對數(shù)期，菌體的比生長率還是很高的，要想融合蛋白表達，一般都是在對數(shù)后期開始誘導(dǎo)，這個時間點積累了大量菌體，誘導(dǎo)后，表達量也高！至于你說的你的目的不是提取蛋白，只是為了研究融合蛋白表達是否影響大腸桿菌的基本性質(zhì)，這個我倒是還沒接觸過。不過看你專業(yè)是生物化學(xué)與分子，我覺得你可以參考下IPTG的誘導(dǎo)機制，再嘗試試驗。呵呵 |
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7樓2016-03-18 10:56:10
nyjznj2010
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8樓2016-03-18 10:57:24
送紅花一朵 |
在od較大時，積累了大量菌體，所以此時加iptg，蛋白表達量較高。 是指每個菌體表達蛋白量不變，而由于菌體數(shù)目增多，導(dǎo)致整體蛋白表達量較高，還是每個菌體在接受iptg不同誘導(dǎo)時間，自身所產(chǎn)生的蛋白量也會發(fā)生變化？~ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
9樓2016-03-18 11:07:47
10樓2016-03-19 10:20:09
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