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[求助]
iptg誘導(dǎo)大腸桿菌表達 已有2人參與
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我做了重組質(zhì)粒，一個蛋白和熒光蛋白的結(jié)合，然后轉(zhuǎn)導(dǎo)到大腸桿菌中。 用iptg誘導(dǎo)載體質(zhì)粒表達，蛋白和熒光蛋白結(jié)合的產(chǎn)物。 但現(xiàn)在出現(xiàn)了大腸桿菌不游動的情況。 經(jīng)過一些實驗驗證，發(fā)現(xiàn)加入iptg的時候，od的值對結(jié)果有一定影響。 但是還是沒有達到想要的結(jié)果，游動雖然有，但還是不正常。 想問iptg誘導(dǎo)，誘導(dǎo)的時間點和溫度對細菌表達可溶性蛋白的產(chǎn)物有多大影響？ 求各位大神解答～ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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nyjznj2010
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日落沙發(fā)12樓2016-03-21 13:18:12
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nyjznj2010
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 一般不都是在對數(shù)生長后期開始誘導(dǎo)的嘛！你可以試試確定一下你這個菌種的生長曲線，一般重組大腸都可以用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)的，37℃搖床培養(yǎng)的話，每一個小時取一下樣，測個OD值，直到OD不再變化，這個時間點前后就可以加入IPTG誘導(dǎo)了。還有就是每次的接種量不同的話，達到對數(shù)生長后期的時間也不一樣咧！如果是37攝氏度發(fā)酵罐培養(yǎng)的，經(jīng)驗上一般接種后4個小時左右就可以誘導(dǎo)了。看你的培養(yǎng)條件了。 |
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4樓2016-03-17 17:11:20
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