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wangyinyuea新蟲 (初入文壇)
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[交流]
單酶切怎么出現(xiàn)了兩條帶 已有7人參與
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如題，本人研究生菜鳥，正在構(gòu)建載體，用的載體是將PUC19改造一下的pEntry，就是在Hind3和Ecor1之間加了一個Not1的酶切位點(diǎn)，目的是串聯(lián)表達(dá)盒，現(xiàn)將這個pEntry用Not1和Ecor1酶切回收載體連接用H3和E1酶切得到的PUC-Ubi::mBt片段以及自制的Linker（含有Not1酶切位點(diǎn)及Hind3的粘端），之前也用過這個pEntry的載體，上面只有一個Hind3的酶切位點(diǎn)，linker的Hind3粘端與片段上的Hind3連接以后，就把該位點(diǎn)消除，所以連接后應(yīng)該只有一個Hind3位點(diǎn)，但我最后用Hind3酶切卻出現(xiàn)兩條帶，已經(jīng)重復(fù)好幾次，都是這樣的結(jié)果，很崩潰，希望路過的大神幫忙看看！萬分感謝！ 圖中從左到右分別為maker，pEntry-Ubi::mBt被Hind3和Ecor1雙酶切、Hind3單酶切、Ecor1單酶切、Hind3和Not1雙酶切以及質(zhì)粒的電泳圖，酶沒有被污染。 .jpg.jpg |
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很簡單，環(huán)狀載體比線性載體跑的快，切開了不就變線性了嘛，證明載體還沒有完全切完唄 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-03-22 22:25:37
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????????}????????N????HindIII??????? ????lane 2?????@HindIII??_??????λ?c, ??????h????_?JpEntry?d?w?????????HindIII??λ? ???????????O????????????}? ????????С???????A??? ????????????????@?????????"pEntry??Not1??Ecor1??л?????????????H3??E1??е????PUC-Ubi::mBt???????????Linker??????Not1???λ??Hind3??????" ???O??????d?wpEntry???@???N??λ: -----HindIII-NotI-EcoRI----- Vector?? 2+3 insert A?? (HindIII)+3 insert B?? 2+(HindIII) ???????????@??, ????3 way ligation???, ????????-----HindIII-NotI-(insert B-HindIII-insert A)-EcoRI----- ??????????HindIII?]?e??XD |
9樓2016-03-24 13:17:21
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