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wangyinyuea新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
單酶切怎么出現(xiàn)了兩條帶 已有7人參與
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如題，本人研究生菜鳥(niǎo)，正在構(gòu)建載體，用的載體是將PUC19改造一下的pEntry，就是在Hind3和Ecor1之間加了一個(gè)Not1的酶切位點(diǎn)，目的是串聯(lián)表達(dá)盒，現(xiàn)將這個(gè)pEntry用Not1和Ecor1酶切回收載體連接用H3和E1酶切得到的PUC-Ubi::mBt片段以及自制的Linker（含有Not1酶切位點(diǎn)及Hind3的粘端），之前也用過(guò)這個(gè)pEntry的載體，上面只有一個(gè)Hind3的酶切位點(diǎn)，linker的Hind3粘端與片段上的Hind3連接以后，就把該位點(diǎn)消除，所以連接后應(yīng)該只有一個(gè)Hind3位點(diǎn)，但我最后用Hind3酶切卻出現(xiàn)兩條帶，已經(jīng)重復(fù)好幾次，都是這樣的結(jié)果，很崩潰，希望路過(guò)的大神幫忙看看！萬(wàn)分感謝！ 圖中從左到右分別為maker，pEntry-Ubi::mBt被Hind3和Ecor1雙酶切、Hind3單酶切、Ecor1單酶切、Hind3和Not1雙酶切以及質(zhì)粒的電泳圖，酶沒(méi)有被污染。 .jpg.jpg |
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9樓2016-03-24 13:17:21
舒?zhèn)?/a>
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西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-03-23 07:18:04
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很簡(jiǎn)單，環(huán)狀載體比線(xiàn)性載體跑的快，切開(kāi)了不就變線(xiàn)性了嘛，證明載體還沒(méi)有完全切完唄 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
2樓2016-03-22 22:25:37
張力民1598
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3樓2016-03-23 00:14:39
wangyinyuea
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4樓2016-03-23 10:00:30
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