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夢(mèng)幻在玩銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于測(cè)序的幾個(gè)問(wèn)題
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就是一段2000bp的序列，已經(jīng)連在了pbs載體上。序列基本是已知的就是為了驗(yàn)證一下順便看看有沒(méi)有突變之類(lèi)的。學(xué)姐說(shuō)現(xiàn)在的那個(gè)公司的測(cè)序宣傳是800，實(shí)際可信的就只有600多bp。幾個(gè)問(wèn)題是醬紫 1，兩端的測(cè)序引物似乎是公司提供的存在于載體上的引物？這是不是意味著序列的兩端都是可信的，不存在引物后面一段測(cè)不準(zhǔn)的情況呢 2，同上，如果兩端的引物是在載體上，我當(dāng)初擴(kuò)增這段序列用的引物（還加上了保護(hù)堿基和酶切位點(diǎn)）就沒(méi)用啦？ 3，那我大概需要新設(shè)計(jì)幾個(gè)測(cè)序引物呢？位置在哪里比較合適哦 剛從實(shí)驗(yàn)室出來(lái)，晚上想問(wèn)問(wèn)公司的人明天回去再和學(xué)姐多交流下，現(xiàn)在坐在通勤上腦袋有點(diǎn)暈，希望大家能幫我理一下思路。。。 補(bǔ)充:看了下測(cè)序公司的引物，兩端分別是T7和T3。那個(gè)這倆我在數(shù)據(jù)庫(kù)上看到，他們被標(biāo)為promoter啊，數(shù)據(jù)庫(kù)里有其他的比如M13都被標(biāo)為primer.這是這倆能夠當(dāng)引物用的意思嗎？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 [ Last edited by 夢(mèng)幻在玩 on 2017-1-14 at 18:51 ] |
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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1，兩端的測(cè)序引物似乎是公司提供的存在于載體上的引物？這是不是意味著序列的兩端都是可信的，不存在引物后面一段測(cè)不準(zhǔn)的情況呢 你學(xué)姐說(shuō)的是對(duì)的，一般雙脫氧測(cè)序可以測(cè)1000bp 左右，前600-800bp 是準(zhǔn)確的，后面的序列如果出現(xiàn)突變不一定真的是突變，也可能是測(cè)序的原因造成的。同時(shí)，測(cè)序時(shí)，引物結(jié)合位置處的后面約50堿基左右也是不準(zhǔn)的，所以一般不用基因特異引物測(cè)序，而在載體上設(shè)計(jì)引物測(cè)序 2，同上，如果兩端的引物是在載體上，我當(dāng)初擴(kuò)增這段序列用的引物（還加上了保護(hù)堿基和酶切位點(diǎn)）就沒(méi)用啦？ 對(duì)于測(cè)序來(lái)說(shuō)，用不上，載體上有通用引物，就用通用引物測(cè)序 3，那我大概需要新設(shè)計(jì)幾個(gè)測(cè)序引物呢？位置在哪里比較合適哦 你需要再設(shè)計(jì)一條引物測(cè)序就夠了，位置在約650bp處設(shè)計(jì)，加上載體的正反向通用引物，做3個(gè)測(cè)序反應(yīng)夠了，可以測(cè)通 剛從實(shí)驗(yàn)室出來(lái)，晚上想問(wèn)問(wèn)公司的人明天回去再和學(xué)姐多交流下，現(xiàn)在坐在通勤上腦袋有點(diǎn)暈，希望大家能幫我理一下思路。。。 補(bǔ)充:看了下測(cè)序公司的引物，兩端分別是T7和T3。那個(gè)這倆我在數(shù)據(jù)庫(kù)上看到，他們被標(biāo)為promoter啊，數(shù)據(jù)庫(kù)里有其他的比如M13都被標(biāo)為primer.這是這倆能夠當(dāng)引物用的意思嗎？ 這兩個(gè)可以當(dāng)通用引物，T7 的序列是特定的 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
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夢(mèng)幻在玩18樓2017-01-15 04:00:51
痞子無(wú)敵
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19樓2017-01-15 08:58:08
夢(mèng)幻在玩
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20樓2017-01-15 10:32:28
夢(mèng)幻在玩
銅蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
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21樓2017-01-15 10:32:48
夢(mèng)幻在玩
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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22樓2017-01-15 10:34:36
簡(jiǎn)單回復(fù)
chentao2樓
2017-01-14 18:27
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chentao3樓
2017-01-14 18:27
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qdbeer4樓
2017-01-14 18:28
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qdbeer5樓
2017-01-14 18:28
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tableman6樓
2017-01-14 18:32
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tableman7樓
2017-01-14 18:32
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假大空8樓
2017-01-14 18:32
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頂
time889樓
2017-01-14 18:38
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time8810樓
2017-01-14 18:38
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超級(jí)老快11樓
2017-01-14 18:42
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l65124012樓
2017-01-14 18:56
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頂 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端
tan91413樓
2017-01-14 18:58
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tan91414樓
2017-01-14 18:58
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tzynew15樓
2017-01-14 19:12
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nono200916樓
2017-01-14 19:58
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dsctg17樓
2017-01-14 20:20
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小兔11123樓
2017-01-15 10:54
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