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關(guān)于誘導表達問題 已有6人參與
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重組菌誘導表達后跑蛋白電泳，結(jié)果如下圖。從左到右依次為maker、重組菌上清、重組菌沉淀、空菌上清和沉淀 重組載體為bl-21-pet-28a，帶his-tag，誘導溫度為16度，時間16小時左右 用16度誘導是看別人說低溫誘導有助于蛋白的正確折疊，可是我這怎么全是包涵體 希望有人能幫我解惑！！�。。。。。。。。�！ H5`P@E1P4E2C}GL@ZV$%R%B.png |
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lialee22
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如果實驗室通用的條件做出來效果好，那就用這個條件。 如果做不出來，那么，誘導表達的所有條件都需要自己去摸索。包括但不限于誘導溫度、IPTG濃度、轉(zhuǎn)速。 實驗室中別人的IPTG濃度0.2mM做得很好，但對于你的菌來說可能還是太高了。 如果不做正交的話，還是挺簡單的。 我當初一開始也是按照前人的條件做，別人就結(jié)果很好，可我就是包涵體。最后經(jīng)過摸索后，我的誘導溫度、IPTG濃度都比其他人的小很多。 總之就是讓它表達慢一點。不過這樣的話要求你目的酶活性要高，不然量太少，后面沒法做。 祝福樓主順利~~~~~~~ |
18樓2017-02-16 10:03:10
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