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[求助] 關(guān)于誘導(dǎo)表達(dá)問(wèn)題已有6人參與

重組菌誘導(dǎo)表達(dá)后跑蛋白電泳，結(jié)果如下圖。從左到右依次為maker、重組菌上清、重組菌沉淀、空菌上清和沉淀
重組載體為bl-21-pet-28a，帶his-tag，誘導(dǎo)溫度為16度，時(shí)間16小時(shí)左右
用16度誘導(dǎo)是看別人說(shuō)低溫誘導(dǎo)有助于蛋白的正確折疊，可是我這怎么全是包涵體
希望有人能幫我解惑！�。。。。。。。。。�！

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1樓 2017-02-14 13:10:05

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3樓: Originally posted by 欒欒silence at 2017-02-14 16:28:56
并不是所有的原核表達(dá)蛋白都會(huì)分泌表達(dá)的，有的就是會(huì)形成包涵體，看到你的上清中其實(shí)也含有一點(diǎn)目的蛋白，你可以將菌體多超聲，多裂解，使其充分裂解，然后只要上清中的目的蛋白，也可以就這樣按照包涵體蛋白的提取 ...

超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)不是會(huì)使蛋白變性嗎？這樣不會(huì)影響酶活性的測(cè)定嗎

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4樓2017-02-14 16:45:35

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seascen2016

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這個(gè)跟蛋白本身性質(zhì)有關(guān)，有的就容易產(chǎn)生包涵體，樓主可以試試少加點(diǎn)誘導(dǎo)劑再試試

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2樓2017-02-14 16:11:25

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欒欒silence

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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-02-15 07:52:41

并不是所有的原核表達(dá)蛋白都會(huì)分泌表達(dá)的，有的就是會(huì)形成包涵體，看到你的上清中其實(shí)也含有一點(diǎn)目的蛋白，你可以將菌體多超聲，多裂解，使其充分裂解，然后只要上清中的目的蛋白，也可以就這樣按照包涵體蛋白的提取方法來(lái)做。

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3樓2017-02-14 16:28:56

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引用回帖:

2樓: Originally posted by seascen2016 at 2017-02-14 16:11:25
這個(gè)跟蛋白本身性質(zhì)有關(guān)，有的就容易產(chǎn)生包涵體，樓主可以試試少加點(diǎn)誘導(dǎo)劑再試試

我們實(shí)驗(yàn)室做誘導(dǎo)表達(dá)的誘導(dǎo)劑終濃度都是0.2mM，應(yīng)該不算高吧

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5樓2017-02-14 16:50:53

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