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蛋白掛不上柱子 已有6人參與
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求大神指點(diǎn)，蛋白純化了一個(gè)月了，還是沒有出來，蛋白是多聚體，表達(dá)在上清里，表達(dá)量還可以，蛋白等電點(diǎn)4.7上下，鎳柱掛不上，q柱和Sp柱，疏水柱也掛不上，q柱流穿里有，但是量少，硫酸銨沉淀是復(fù)溶后上清里量也很少 Q柱2 緩沖液Tris-HCl Ph：8.0 20mM Tris-HCl 電導(dǎo)：1.53 蛋白： Ph：8.0 20mM Tris-HCl 電導(dǎo)：1.3 sp柱 緩沖液PB Ph：6.56 20mM PB 電導(dǎo)：1.89 蛋白 Ph：6.56 電導(dǎo)：1.57 1ml蛋白+4ml H2O 洗脫：500mMNaCL+20mMPB 1MNaCL+20mMPB |
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Q柱，降低上樣流速！檢查樣品pH,電導(dǎo)是否與平衡緩沖液一致！SP柱平衡緩沖液pH都已經(jīng)高于目標(biāo)蛋白等電點(diǎn)了！肯定掛不上去！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-03-23 11:47:36
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