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jessica_nn銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
his重組蛋白掛不上鎳柱子的原因
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構(gòu)建好的帶有HIS標(biāo)簽的載體，誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白，在純化的時(shí)候發(fā)現(xiàn)，目的蛋白（上清，可溶表達(dá)）掛不上柱子，都在流穿液中，重新再生了柱子，結(jié)果還是掛上，緩沖液成分：1M Tris-HCl pH7.9, 0,5M NaCl ,10%甘油 ，咪唑（0-500mM,按需要配置），高手們指導(dǎo)一下，可能是什么原因呢？會(huì)不會(huì)是HIS標(biāo)簽掉了，怎么檢測(cè)HIS標(biāo)簽是否存在呢？下圖是SDS-PAGE檢測(cè)電泳：（第一條帶是含200mM咪唑的除雜蛋白的洗脫液，第二條帶是流穿液，第三條帶是Marker,Marker右面點(diǎn)了5個(gè)純化蛋白的樣，可是一個(gè)條帶都沒有） |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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2樓2013-06-03 10:11:20
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jessica_nn(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-06-03 18:19:09
jessica_nn(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-06-03 18:19:09
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3樓2013-06-03 15:47:14
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