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quzhongzhi新蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR,關于陰性條帶污染的求助 已有1人參與
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我跟導師做的是豬星狀病毒的PCR檢測，現(xiàn)在在做模板的梯度稀釋，可是老是出現(xiàn)污染，我模板才250bp，陰性條帶卻有2000多bp的污染，重復了兩遍還是一樣。問題是我一個禮拜之前陰性條帶還好好的，只是重做了一遍割膠回收再稀釋就不行了。稀釋引物母液是在超凈臺通風操作（沒有紫外燈滅菌），因為師兄也這么做，他好像沒有過這種問題，我的引物感覺真不好說，也有可能水，或者2X taq MIX出現(xiàn)問題，或者我用的ep管有問題。但因為陰性有條帶，所以暫時覺得模板割膠回收和稀釋應該沒事。想知道有沒有相似經(jīng)歷的大神，告訴我這么大的片段是由什么引起的。 201704080102.jpg |
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2樓2017-04-09 11:26:57
skull123
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這么說吧，一旦出現(xiàn)污染，很難搞的，或者你可以去另一個距離較遠的沒有做過這類實驗的實驗室做這個實驗（不要帶現(xiàn)有的儀器，試劑過去），還有一個終極武器，合成另一個部位的引物，擴另一個片段，不擴這個片段了 平常pcr的產(chǎn)物和膠、槍頭、ep管什么的，如果不要了，就把它們泡在5%的84溶液密封罐子中，滿了就直接丟掉，污染的最大源頭是擴增產(chǎn)物 |
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quzhongzhi3樓2017-04-09 15:35:58
quzhongzhi
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4樓2017-04-09 22:15:24
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5樓2017-04-09 22:31:57
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，實在不行只能重新割膠回收了6樓2017-04-09 23:00:30
skull123
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7樓2017-04-11 17:39:20
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8樓2018-11-14 15:31:26
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