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quzhongzhi新蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR,關(guān)于陰性條帶污染的求助 已有1人參與
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我跟導(dǎo)師做的是豬星狀病毒的PCR檢測(cè)，現(xiàn)在在做模板的梯度稀釋，可是老是出現(xiàn)污染，我模板才250bp，陰性條帶卻有2000多bp的污染，重復(fù)了兩遍還是一樣。問題是我一個(gè)禮拜之前陰性條帶還好好的，只是重做了一遍割膠回收再稀釋就不行了。稀釋引物母液是在超凈臺(tái)通風(fēng)操作（沒有紫外燈滅菌），因?yàn)閹熜忠策@么做，他好像沒有過這種問題，我的引物感覺真不好說，也有可能水，或者2X taq MIX出現(xiàn)問題，或者我用的ep管有問題。但因?yàn)殛幮杂袟l帶，所以暫時(shí)覺得模板割膠回收和稀釋應(yīng)該沒事。想知道有沒有相似經(jīng)歷的大神，告訴我這么大的片段是由什么引起的。 201704080102.jpg |
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quzhongzhi
新蟲 (初入文壇)
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4樓2017-04-09 22:15:24
2樓2017-04-09 11:26:57
skull123
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- 專業(yè): 病原微生物與感染研究與診
這么說吧，一旦出現(xiàn)污染，很難搞的，或者你可以去另一個(gè)距離較遠(yuǎn)的沒有做過這類實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室做這個(gè)實(shí)驗(yàn)（不要帶現(xiàn)有的儀器，試劑過去），還有一個(gè)終極武器，合成另一個(gè)部位的引物，擴(kuò)另一個(gè)片段，不擴(kuò)這個(gè)片段了 平常pcr的產(chǎn)物和膠、槍頭、ep管什么的，如果不要了，就把它們泡在5%的84溶液密封罐子中，滿了就直接丟掉，污染的最大源頭是擴(kuò)增產(chǎn)物 |
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3樓2017-04-09 15:35:58
vincent_hpax
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5樓2017-04-09 22:31:57
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