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xiangao金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】pET載體酶切 已有4人參與
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pET系列的載體很容易切散掉，大家有沒(méi)有好的建議？ 比如雙酶切BamHI+XhoI,同時(shí)雙酶切3個(gè)小時(shí)可以嗎？ 轉(zhuǎn)化菌假陽(yáng)性應(yīng)該很多 |
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
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正常情況是不會(huì)發(fā)生這種問(wèn)題的： 1、樓主是用DH5α提質(zhì)粒嗎?一般的表達(dá)菌株像BL21這樣的因?yàn)闆](méi)有突變核酸酶會(huì)這樣。 2、檢查一下酶切用的buffer可能污染了，換一管試試。 3、如果是手提質(zhì)粒，請(qǐng)?jiān)谝掖汲恋碇凹右徊椒勇确鲁樘岚训鞍壮蓛簦竺嫒芙鈺r(shí)加rnase去RNA 4、如果是試劑盒提不要忘了用試劑盒里的除蛋白buffer。菌的用量不要超過(guò)試劑盒規(guī)定的極限。 5、雙酶切的時(shí)間要看你的體系，如果按照說(shuō)明書(shū)上的比例做應(yīng)該問(wèn)題不大。 |
2樓2009-12-15 19:30:19
3樓2009-12-15 19:38:05
4樓2009-12-15 19:42:10
TAMAHOME
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5樓2009-12-15 21:25:20
xiangao
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6樓2009-12-15 22:54:47
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7樓2009-12-16 14:18:01
呵呵，我也遇到了類似的問(wèn)題，在此謝謝各位大俠的幫助！
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8樓2011-04-12 20:00:42
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10樓2011-04-13 09:12:33
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