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microdiag鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
【原創(chuàng)】HRM技術(shù)應(yīng)用于SNP、突變和甲基化檢測 已有14人參與
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現(xiàn)階段,大家檢測SNP時都用一貫的檢測方法,包括測序,探針還有DHPLC等等,而甲基化大多用MSP.至于HRM技術(shù)(高分辨率溶解曲線技術(shù))并不為大家所熟知,有兩個原因:1)適合做HRM技術(shù)的儀器太少了,而且在國內(nèi)的普及程度不高,具我了解能夠做HRM的有Roche LightCycler 480,Qiagen Roter-Gene 6000,ABI 7500 Fast和ABI7900HT Fast,Idaho LightScanncer.其中羅氏的480在其軟件分析上是做的最好的.2)HRM的實驗靈敏度太高,影響實驗因素過多,很多人都做了,但是就是做不出來.因此就放棄,就換用其他比較成熟的方法.殊不知,HRM技術(shù)的檢測方法有其他技術(shù)難以比擬的優(yōu)勢，不僅能實現(xiàn)高通量和高精度的同時,PCR和熒光定量在同一管內(nèi)進行,能夠有效避免假陽性. 作為新一代的遺傳掃描工具,HRM具有"簡,效,快,廉"等其他技術(shù)難以比擬的優(yōu)勢: 簡:無需序列特異性探針,不受堿基位點局限,同時檢出已知或未知突變、SNP和甲基化位點：閉管操作，避免交叉污染。 效：最低檢測0.1%-0，01%的突變或異常甲基化，檢測SNP靈敏度和特異性均為100%。 快：1次同時不多于384個樣本，在60-90分鐘內(nèi)完成檢測。 廉：簡化操作步驟、降低人工和試劑成本，費用遠少于測序、Taqman探針等方法。 HRM技術(shù)特別適用于樣本量多、檢測位點較少的SNP、突變或甲基化分析，是不同于基因芯片檢測方法（檢測位點多，樣本少）的高通量方法。同時，也是基因芯片篩選后的多個基因在更多標(biāo)本中驗證的最佳方法。 |
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jfly2008
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jfly2008
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snp、突變和甲基化實驗解決的更佳方案
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HRM介紹 HRM技術(shù)是high-resolution melting analysis即高分辨熔解曲線分析技術(shù)，是近年國外興起的一種全新的突變掃描和基因分型的遺傳分析方法�；诟咝Х�(wěn)健的PCR技術(shù)，HRM不受突變堿基位點與類型局限，無需序列特異性探針，在PCR結(jié)束后直接運行高分辨熔解，即可完成對樣品突變、單核苷酸多態(tài)性-SNP、甲基化、HLA配型等的分析。 HRM原理 HRM的主要原理是根據(jù)DNA序列的長度，GC含量以及堿基互補性差異，應(yīng)用高分辨率的熔解曲線對樣品進行分析，極高的溫度均一性和溫度分辨率使分辨精度達到對單個堿基差異的區(qū)分。 HRM應(yīng)用 l SNP（單核苷酸多態(tài)性）的篩查。 l 基因突變掃描，包括缺失、重復(fù)、點突變。 l 新突變的篩查。 l 甲基化的篩查。 l 遺傳育種中特定突變的篩查、未知突變的發(fā)現(xiàn)。 l HLA基因組配型、等位基因頻率分析、物種鑒定、品種鑒定、甲基化研究。 l 法醫(yī)學(xué)鑒定、親子鑒定。 l 動植物品質(zhì)相關(guān)多態(tài)性位點的研究等。植物抗逆性，突變與性狀關(guān)聯(lián)性研究。 |
4樓2010-06-11 14:55:50
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