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藍(lán)色雪狐金蟲 (正式寫手)
歐洲漂流
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[交流]
【求助/交流】求教電泳的基本問題 已有4人參與
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各位蟲友，小弟新近做電泳，主要做蛋白的，SDS-PAGE，也做PAGE。目前剛上手，因此想找本書了解一下電泳實(shí)驗(yàn)技術(shù)。請(qǐng)教各位，能否告知一本比較好的介紹電泳實(shí)驗(yàn)技術(shù)的書籍給小弟？如果方便，希望附上您的簡(jiǎn)單評(píng)論。謝謝！ 不勝感激，謝謝！一點(diǎn)金幣不成敬意…… [ Last edited by 藍(lán)色雪狐 on 2010-5-1 at 20:56 ] |
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藍(lán)色雪狐
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2樓2010-05-01 21:04:57
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藍(lán)色雪狐(金幣+2):謝謝交流經(jīng)驗(yàn)心得~ 2010-05-02 10:13
1949stone(金幣+2): 2010-05-02 14:35
藍(lán)色雪狐(金幣+2):謝謝交流經(jīng)驗(yàn)心得~ 2010-05-02 10:13
1949stone(金幣+2): 2010-05-02 14:35
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沒有太多講究的，我們天天做，不過想跑的很漂亮，泳道上下條帶都很清晰確實(shí)很難，看過老外有跑出很好的效果的。 說一下我做SDS-PAGE的經(jīng)驗(yàn)吧，首先是把膠板做好，然后樣品處理好也很關(guān)鍵，不要忘了離心一下，點(diǎn)樣的時(shí)候盡量使樣品在膠空里緊湊一些，正常電壓跑出來，脫色的時(shí)候細(xì)致一點(diǎn)，不要脫過了就行。 |
3樓2010-05-02 09:01:51
liyong1981 
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4樓2010-05-04 10:30:43
木星海
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藍(lán)色雪狐(金幣+3):謝謝你的經(jīng)驗(yàn)之談~ 2010-05-04 12:09
lstt09nk(金幣+2):認(rèn)真實(shí)驗(yàn)的MM，贊~~ 2010-05-04 12:23
藍(lán)色雪狐(金幣+3):謝謝你的經(jīng)驗(yàn)之談~ 2010-05-04 12:09
lstt09nk(金幣+2):認(rèn)真實(shí)驗(yàn)的MM，贊~~ 2010-05-04 12:23
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我自己也經(jīng)常做SDS-PAGE，只是有時(shí)候掌握不好 常常效果不怎么樣 所以，我總結(jié)了幾個(gè)要注意的小點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)只要能好好注意這些方面，一般問題不大。 1、有專門的文章分析濃縮膠和分離膠的接縫不密合問題。找來看！ 2、膠面比較臟，要檢查染液是不是用的久了，可以用濾紙和漏斗過濾一下； 3、每次配完膠不要馬上跑電泳，時(shí)間多的話，最好放上一天半天再用，因?yàn)閯傋鐾甑哪z，看著是凝固了，但里面有可能還沒有聚合；也盡量不要放到4度冰箱保存，SDS在低溫下會(huì)結(jié)晶析出； 4、在做膠前，玻璃板要洗干凈，可能之前有人做后玻璃板沒有洗干凈，有時(shí)候別人有手指印留在上面，有油性，影響蛋白質(zhì)的遷移； 5、染色的時(shí)候要注意，染液要比較燙會(huì)好一些，我一般微波染色三次，第一次20s，第二、三次10s；加入SDS的量要根據(jù)蛋白質(zhì)的含量來確定，跑膠之前可以先測(cè)一下蛋白含量，如果加入量太多，可能會(huì)導(dǎo)致蛋白稀釋太厲害，也會(huì)擠著旁邊的蛋白條帶。 6、配膠的時(shí)候盡量把板放平，做好了膠，也不要去動(dòng)它，不然會(huì)容易歪了，到時(shí)候蛋白質(zhì)就不會(huì)在同一起跑線上了； 7、電泳時(shí)注意不要把電極插反； 8、脫色不宜太久，一般過夜后觀察，如果沒有脫干凈，可以換上脫色液再在搖床上搖半個(gè)小時(shí)基本上就可以了。 |
5樓2010-05-04 10:50:19
liyong1981
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6樓2010-05-04 11:38:52
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