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藍色雪狐金蟲 (正式寫手)
歐洲漂流
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[交流]
【求助/交流】求教電泳的基本問題 已有4人參與
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各位蟲友，小弟新近做電泳，主要做蛋白的，SDS-PAGE，也做PAGE。目前剛上手，因此想找本書了解一下電泳實驗技術。請教各位，能否告知一本比較好的介紹電泳實驗技術的書籍給小弟？如果方便，希望附上您的簡單評論。謝謝！ 不勝感激，謝謝！一點金幣不成敬意…… [ Last edited by 藍色雪狐 on 2010-5-1 at 20:56 ] |
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3樓2010-05-02 09:01:51
liyong1981 
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4樓2010-05-04 10:30:43
木星海
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藍色雪狐(金幣+3):謝謝你的經驗之談~ 2010-05-04 12:09
lstt09nk(金幣+2):認真實驗的MM，贊~~ 2010-05-04 12:23
藍色雪狐(金幣+3):謝謝你的經驗之談~ 2010-05-04 12:09
lstt09nk(金幣+2):認真實驗的MM，贊~~ 2010-05-04 12:23
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我自己也經常做SDS-PAGE，只是有時候掌握不好 常常效果不怎么樣 所以，我總結了幾個要注意的小點，發(fā)現(xiàn)只要能好好注意這些方面，一般問題不大。 1、有專門的文章分析濃縮膠和分離膠的接縫不密合問題。找來看！ 2、膠面比較臟，要檢查染液是不是用的久了，可以用濾紙和漏斗過濾一下； 3、每次配完膠不要馬上跑電泳，時間多的話，最好放上一天半天再用，因為剛做完的膠，看著是凝固了，但里面有可能還沒有聚合；也盡量不要放到4度冰箱保存，SDS在低溫下會結晶析出； 4、在做膠前，玻璃板要洗干凈，可能之前有人做后玻璃板沒有洗干凈，有時候別人有手指印留在上面，有油性，影響蛋白質的遷移； 5、染色的時候要注意，染液要比較燙會好一些，我一般微波染色三次，第一次20s，第二、三次10s；加入SDS的量要根據(jù)蛋白質的含量來確定，跑膠之前可以先測一下蛋白含量，如果加入量太多，可能會導致蛋白稀釋太厲害，也會擠著旁邊的蛋白條帶。 6、配膠的時候盡量把板放平，做好了膠，也不要去動它，不然會容易歪了，到時候蛋白質就不會在同一起跑線上了； 7、電泳時注意不要把電極插反； 8、脫色不宜太久，一般過夜后觀察，如果沒有脫干凈，可以換上脫色液再在搖床上搖半個小時基本上就可以了。 |
5樓2010-05-04 10:50:19
liyong1981
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6樓2010-05-04 11:38:52
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