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bjlumang鐵桿木蟲(chóng) (知名作家)
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[交流]
【討論】PCR-DGGE 已有1人參與
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| 問(wèn)個(gè)問(wèn)題哈,向大家。我采用PCR-DGGE的方法從土壤中提取的總DNA中獲得了電泳圖,有幾條條帶,那么是否可以對(duì)每個(gè)條帶的DNA再測(cè)序來(lái)知道這個(gè)條帶主要是什么菌呢?用什么方法? |
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
| DGGE后出來(lái)的條帶可以進(jìn)行測(cè)序,但是不一定是單一菌種的,因?yàn)镈GGE只對(duì)不同長(zhǎng)度的PCR產(chǎn)物進(jìn)行分離,長(zhǎng)度一樣的可能就分離不出來(lái)了。我一般采用兩種方法,一是DGGE割膠純化,對(duì)目的條帶割膠后再用DGGE純化得到單一條帶后再直接測(cè)序,但是這個(gè)方法比較麻煩,操作不好的話還很容易污染;再一個(gè)就是對(duì)割膠產(chǎn)物進(jìn)行克隆然后測(cè)序,也不簡(jiǎn)單呵呵。 |
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