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xclj369ouc金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】ITS測(cè)序 已有13人參與
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請(qǐng)教大家誰有測(cè)過ITS序列？ 是直接PCR產(chǎn)物測(cè)序的，還是克隆測(cè)序的�。� |
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1949stone(金幣+2):謝謝交流 2010-05-09 17:33:28
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1949stone(金幣+2):謝謝交流 2010-05-09 17:33:28
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我們一般是PCR以后再去測(cè)序的。 無論是哪種方法得到的序列，在自動(dòng)測(cè)序儀上都具有測(cè)序引物與模板的識(shí)別、結(jié)合過程，使得靠近引物端的堿基測(cè)序信號(hào)弱，不易讀出。對(duì)于克隆測(cè)序，讀不出的是部分載體序列，而直接測(cè)序讀不出的是ITS片段的部分序列，所以前者所得序列的更符合ITS全長(zhǎng)。 但直接測(cè)序要快速方便，而克隆測(cè)序費(fèi)時(shí)費(fèi)力 |
4樓2010-05-09 14:41:41
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reasonspare(金幣+1):謝謝分享。 2010-06-23 06:04:53
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首先轉(zhuǎn)錄酶有很多種，雖然準(zhǔn)確度很高，但是擴(kuò)增產(chǎn)物多，即使是一億分之一的出錯(cuò)率，也會(huì)有極少數(shù)堿基出錯(cuò)。 連接到載體上之后轉(zhuǎn)化宿主，在宿主體內(nèi)擴(kuò)增的過程中，由一個(gè)拷貝增加到億個(gè)拷貝，宿主的擴(kuò)增系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生極少數(shù)堿基出錯(cuò)。 宿主郵寄到測(cè)序公司后進(jìn)行擴(kuò)增提取質(zhì)粒，質(zhì)粒又進(jìn)行多次擴(kuò)增，也可能出錯(cuò)。當(dāng)然也可以用菌體PCR，不過難度明顯比用質(zhì)粒為模板高。 這下應(yīng)該明白我為什么用PCR產(chǎn)物來測(cè)序了吧？ |
10樓2010-05-09 21:50:11
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