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shawne2008木蟲 (著名寫手)
木蟲反貪局局長
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[交流]
【求助/交流】真菌提取基因組DNA的方法 已有7人參與
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| 近來做耐鹽菌篩選，已經(jīng)做到提取DNA測序的階段了，可是破壁的問題卻一直不理想，幾種方法都試過，可是效果不好，不知大家有什么方法和經(jīng)驗(yàn)提供一下，謝謝�。�！ |
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fungixx
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2樓2010-05-28 23:37:36
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shawne2008(金幣+10): 2010-05-29 00:10:05
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1. 將樣品放在滅過菌的研缽中，加入液氮搗碎，迅速轉(zhuǎn)入1.5ml離心管中，加入600mlCTAB（或同時加入石英砂和CTAB研磨，然 后轉(zhuǎn)入1.5ml離心管中）； 2. 65℃水浴1h（每20min反轉(zhuǎn)搖勻一次）； 3. 加等體積的氯仿－異戊醇（體積比24：1），或加入苯酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），顛倒混勻； 4. 6500rpm離心30min，取上清于新管中； 5. 重復(fù)4，5步驟； 6. 向上清中加入2倍體積的無水乙醇（或2/3體積的異丙醇）沉淀DNA，-20℃放置20min或更長時間，或過夜； 7. 加75％的乙醇清洗DNA，每次12000rpm 2min，去上清； 8. 風(fēng)干后加入40ul的TE緩沖液溶解DNA； 9. 取2ul溶液電泳檢測。 |
4樓2010-05-29 00:04:30
ltakashi
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8樓2012-04-27 21:31:43
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