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dapaosheng木蟲 (著名寫手)
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[交流]
【求助/交流】反轉(zhuǎn)錄有問題 已有2人參與
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最近一直在做反轉(zhuǎn)錄的實(shí)驗(yàn)，但卻沒有擴(kuò)增出我要的目的片段，不知道究竟是RNA質(zhì)量不好還是引物設(shè)計(jì)有問題。我把我提取的RNA（用家蠶頭部提取的）發(fā)給各位看看，大家覺得能用來做反轉(zhuǎn)錄嗎？我想針對(duì)鱗翅目昆蟲的乙酰膽堿酯酶基因設(shè)計(jì)一對(duì)簡(jiǎn)并引物，應(yīng)該怎樣做呢？已經(jīng)根據(jù)國內(nèi)發(fā)表的文章提供的序列設(shè)計(jì)特異的引物擴(kuò)增過了，但擴(kuò)增不出目的片段，所以有點(diǎn)懷疑他們提交的序列是假的，因此想自己設(shè)計(jì)一對(duì)簡(jiǎn)并引物來擴(kuò)增家蠶的乙酰膽堿酯酶基因。請(qǐng)各位高手指點(diǎn)一下！  |
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fungixx
至尊木蟲 (文壇精英)
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
scelab(金幣+3):歡迎多來交流！:tiger06: 2010-05-30 21:20:08
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scelab(金幣+3):歡迎多來交流！:tiger06: 2010-05-30 21:20:08
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RNA提的挺好的。。。不一定是他們的問題。。。不同家蠶之間同一基因會(huì)有一定的差異的。�？赡苣阍O(shè)計(jì)的３‘端正好不同。。要不你在設(shè)計(jì)幾條引物看看； 要是擴(kuò)增保守去的話，你比對(duì)幾個(gè)近源物種的乙酰膽堿酯酶蛋白序列，找到保守區(qū)，根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)兼并引物。。。拿到保守區(qū)后再做RACE。。 |
2樓2010-05-30 18:00:09
3樓2010-05-30 18:43:42
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